绒毛膜癌（简称绒癌）是由于滋养层细胞过度侵袭和增殖导致的一种恶性肿瘤，早期就容易发生转移，若诊治不及时可能会导致广泛转移，严重影响患者预后[1-2]。二氢杨梅素(dihydromyricetin，DMY）属黄酮类化合物，具有消炎、止咳、祛痰、镇痛的作用[3]。另外，二氢杨梅素还具有抑制肿瘤细胞的多药耐药、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭迁移的作用[4-6]。但二氢杨梅素对绒癌细胞系的作用文献报道较少。本研究以绒癌JAR细胞为研究对象，观察二氢杨梅素对绒癌JAR细胞MMP-2 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA表达的影响，为探讨二氢杨梅素影响绒癌侵袭转移的机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 细胞来源和主要试剂 人绒癌JAR细胞株，购自广州吉妮欧生物科技有限公司。二氢杨梅素，购自国家标准物质网（批号17031501）；胎牛血清、DMEM、PBS磷酸盐缓冲液、0.25%胰蛋白酶，美国GIBCOBRL公司；Trizol总RNA提取试剂，美国Invitrogen公司；2步法RT-qPCR试剂盒、染料法qPCR试剂盒、引物MMP-2、引物GAPDH、引物PI3K、引物Akt，日本TaKaRa公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：JAR细胞在37℃含5% CO2的培养箱内培养，培养基为含10%胎牛血清的DMEM完全培养基。当细胞融合度达70%～80%时，用含0.25% EDTA的胰酶消化传代。

1.2.2 实时定量qPCR法检测JAR细胞MMP-2 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA的表达：取消化后细胞以2.5×105/ml的浓度种植于60mm细胞培养皿中，待细胞融合度达到40%～50%时，给予终浓度为60μg/ml的二氢杨梅素，继续培养36h；同时设立0μg/ml 二氢杨梅素为对照组。收集细胞，提取总RNA。按照试剂盒体系进行PCR反应，反应条件为：95℃30sec；95℃5sec，60℃30sec；共45个循环。引物序列见表1。采用2-ΔΔCt相对定量法分析实验结果，ΔΔCt=实验组（Ct目的基因-Ct管家基因）-对照组（Ct目的基因-Ct管家基因），相对表达量=2-ΔΔCt。

表1 引物序列

基因 引物序列GAPDH F：GCACCGTCAAGGCTGAGAAC R：TGGTGAAGACGCCAGTGGA MMP-2 F：AGTTTCCATTCCGCTTCCAG R：CGGTCGTAGTCCTCAGTGGT PI3K F：GGAATGCTGCAAGATCAAGAAA R：TTGGTGGTAATGGAAGAGGAAGA Akt F：CTTGCTTTCAGGGCTGCTCA R：TACACGTGCTGCCACACGATAC

1.3 统计分析 应用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析，计量资料的以均数±标准差（± s ）的形式表示，两组间比较采用t检验，相关分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 二氢杨梅素对JAR细胞MMP-2 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA表达的影响 与对照组相比，浓度为60μg/ml的二氢杨梅素作用JAR细胞36h，MMP-2 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA的表达水平明显降低（P＜0.05）。见表2：

2 结果

1）CAXA绘图部分。该部分共设计七个学习任务，主要知识点包括：直线、坐标系、平行线和镜像、裁剪等命令，圆弧、圆、裁剪、阵列，角度线、等分线、镜像、裁剪、延伸、旋转等命令，简单标注命令，公差标注、表面粗糙度标注、形位公差标注等命令，综合练习（一）和技术要求，综合练习（二）。

表2 各组JAR细胞MMP-2 mRNA、PI3K mRNA、Akt mRNA的表达情况（± s ）

组别 n MMP-2 mRNA PI3K mRNA Akt mRNA对照组 4 1.00±0.01 1.00±0.01 1.00±0.01二氢杨梅素组 4 0.62±0.12 0.77±0.11 0.79±0.17 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

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附图 JAR细胞MMP-2 mRNA表达水平与PI3KmRNA、Akt mRNA表达水平的相关性

（A.MMP-2 mRNA与PI3K mRNA，B.MMP-2 mRNA与Akt mRNA）

3 讨论

绒癌是发生于葡萄胎、流产、足月产后数月至数年的恶性肿瘤，少数为原发性[7]，主要经血液播散，转移发生早且广泛，最常见的转移部位是肺(80%)[8]。研究表明，绒癌细胞主要通过MMP-2降解Ⅳ型胶原和破坏靠近肿瘤表面的细胞外基质，进而促进绒癌细胞的侵袭和迁移[9-10]。全身性化疗是治疗转移性绒癌的主要方法，多数病例可获得完全缓解，但有部分患者由于对化疗药物耐药而预后不良[8]。因此，优化药物治疗绒癌，成为亟待解决的问题。

二氢杨梅素是一种二氢黄酮醇类化合物，具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤、降血糖及抗糖尿病并发症等多方面的作用[3-6]。并且有研究显示，二氢杨梅素可明显抑制人乳腺癌肿瘤细胞中MMP-2基因和蛋白的表达[6]。为探讨二氢杨梅素对绒癌JAR细胞的作用及是否通过影响MMP-2基因影响绒癌的侵袭转移，本研究发现二氢杨梅素（60μg/ml）作用36h，绒癌JAR细胞MMP-2 mRNA的表达水平明显降低，说明二氢杨梅素可能通过下调绒癌JAR细胞MMP-2基因的表达影响JAR细胞的侵袭和转移。有研究发现，PI3K/Akt信号通路与肿瘤细胞的侵袭转移有着密切关系[12-13]；王亚欣等的研究也显示，PI3K/Akt信号通路与绒癌JAR细胞和JEG-3细胞的迁移侵袭能力相关，且该通路可诱导侵袭表型的发生[14]；另外，Wang等的研究发现，二羟环氧苯并芘可通过PI3K/Akt信号通路抑制人滋养层HTR-8/SVneo细胞MMP-2蛋白的表达，并提出MMP-2为PI3K/Akt的下游分子[15]。本研究亦有类似发现，浓度为60μg/ml的二氢杨梅素作用36h，JAR细胞PI3K mRNA、Akt mRNA的表达水平亦明显降低，且JAR细胞MMP-2 mRNA表达水平与PI3K mRNA、Akt mRNA表达水平呈正相关关系。本研究提示二氢杨梅素可能通过PI3K/Akt信号通路抑制绒癌MMP-2 mRNA的表达，进而抑制绒癌细胞的侵袭转移，但尚需其他研究方法进一步验证上述结果。

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她为了活下去，或者说，为了活得更滋润些，哪个男人看中她，她也看中他，她就和他好。聚聚散散，她都不放在心上，她心里只有他，只有诗。

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1.5 统计学方法 采用SPSS 19.0进行统计结果处理，计量资料采用±s)表示结果，选用t检验，计数资料选用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

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简洁的文字、鲜明的形象、丰富的情感和深刻的思想是构成“冰山原则”的四个基本要素。具体来说，文字和形象是露在水面看得见的“八分之一”部分；而情感和思想就是所谓的隐藏在水下看不见的“八分之七”部分；利用最简洁的语言文字创造出生动鲜明的形象，而情感及思想则最大限度地隐藏于作品的形象之中。

2.2 JAR细胞MMP-2 mRNA表达与PI3K mRNA、Akt mRNA表达的相关性 浓度为60μg/ml的二氢杨梅素作用36h，JAR细胞MMP-2 mRNA的表达水平与PI3K mRNA、Akt mRNA的表达水平呈正相关关系（r=0.957、0.953，P＜0.05）。见附图：

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客观、科学衡量县域经济发展水平是一项具有系统性、动态性和相对性的复杂工作.构建经济综合评价体系需要依据科学性、全面性和可获取性原则，参考前人相关研究成果[15-16]并结合成都平原城市群经济发展的实际情况，从经济规模、经济效益、经济结构和政府调控能力4个方面，选取了17个具体评价指标，从而构建了县域经济综合评价指标体系(见表1).

【参考文献】

目前，“互联网+”还不能完全支撑起会计工作，因为在实际应用中，财务会计软件大都相似，没有创新性。这就会造成由于财务会计的软件和功能单一而在财务系统中产生漏洞的现象，加大了财务信息泄露的风险；再者单一功能没有创新的软件也会导致会计工作效率和质量的下降以及技术的落后。

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研究采用武汉大学沈阳博士课题组编写的ROST Content Mining(Version 6.0，简称ROST-CM6)软件进行数据辅助分析。ROST-CM6在定性数据分析方面具有较好的效果，旅游及其他研究领域已经有不少学者使用它进行数据分析[28-29]。在使用计算机辅助的定性分析软件之前，数据清洗整理是必要的[30]。首先，笔者对游记的内容和格式进行整理、统一，删除对游记内容和意义表达无关的标点和空格；然后，将游记文本中表示和指向同一地段或景点的相近表达进行统一[31]，如将“风光”“景色”“美景”等统一为“风景”。

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