球孢白僵菌〔Beauveria bassiana(Balsamo)Vuillemin〕是一种重要的广谱性昆虫病原真菌，在真菌分类学上属于半知菌亚门(Deuteromycotina)，丝孢纲(Hyphomycetes)，丛梗孢目(Moniliales)，丛梗孢科(Moniliaceae)，白僵菌属(Beauveria)。球孢白僵菌菌落呈绒状、丛卷毛至粉状，有时呈绳索状，但很少形成孢梗索[1]。球孢白僵菌是一种寄生真菌，昆虫是其最好的培养基。白僵菌的寄生范围极广，能侵染15个目149个科的700多种昆虫及蜱螨目(Arachnoidea)6个科的10余种蜱螨类[2]。根据野外调查越冬昆虫发现，因白僵菌致死的昆虫占真菌致病总数的21%[3]。球孢白僵菌作为一类重要的天敌生物资源，因其易于生产、寄主范围广、侵染期长、不伤害人和其他脊椎动物，尤其是其流行潜力大而倍受人们的关注[4]，因而其具有广泛的应用前景。近年来，球孢白僵菌作为生物农药被使用[5-15]。但在实际运用中，通过径流、淋溶等途径进入到水体中，又由于微生物具有侵染性，可能会对水生生态环境造成威胁，致使水生生物生存环境恶化，进而影响其生长、繁殖，甚至导致死亡。藻类是水体中的初级生产者，因其细胞特征明显，易于培养，且试验结果重现性较好，被广泛应用于DON的生物有效性研究[16-19]。但藻类的死亡影响次级生产者如浮游动物和鱼类等的生存，进而对整个水生生态系统产生破坏。目前国内基于球孢白僵菌对水生生物的毒性试验未见报道。因此，为探明球孢白僵菌施用的安全性，以羊角月牙藻为供试生物，探讨其对水体环境的影响，为规范和合理使用球孢白僵菌提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

主要仪器：S200藻类计数仪(Nikon，日本)，自动蒸汽灭菌锅(D-1，上海)，LRH-300-JB人工气候震荡培养箱，FA2104电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)，pHS-3C pH计(上海精密仪器仪表有限公司)，照度计；300 mL广口三角瓶。

受试生物：羊角月牙藻，2016年5月购自中国科学院水生生物研究所。

供试物：球孢白僵菌由农业部农药检定所提供，浓度为500亿孢子/g。药品于试验当天用藻培养基配制成母液，120 r/min震荡30 min后用藻培养基稀释至试验所需浓度。

“没错。那天当测试员是假期兼职，我大部分时间在这里工作。”她轻轻敲敲下巴，“我认得这个名字，首跳者也是你吧?”

1.2 羊角月牙藻的预培养

从储备培养物中取出一定量的羊角月牙藻，接种到新鲜无菌AAM培养基中，每升培养基参照文献[20]，接种的藻细胞浓度大约为104个/mL。藻种置于恒温震荡光照培养箱内培养，培养条件为光暗周期12 h∶12 h，光照强度4 400～8 800 lx，温度(23±2)℃，震荡频率120 r/min，藻种在3 d内达到对数生长。然后再次转接到新鲜的培养基中，如此反复转接培养2～3次，经镜检藻类生长健壮无污染并正处于对数生长期，以此制备试验中需要的羊角月牙藻试验液。

1.3 溶液配制

1.3.1 羊角月牙藻溶液 对转接至对数生长期的羊角月牙藻细胞进行计数，将羊角月牙藻细胞用灭菌的培养基稀释至2×104 个/mL。即为制备的羊角月牙藻溶液。

1.3.2 球孢白僵菌溶液 预试验溶液浓度：2×105个/mL和2×106个/mL；毒性试验溶液浓度：2×105个/mL，3.2×105个/mL，5.2×105个/mL，8.2×105个/mL，1.32×105个/mL。

1.3.3 球孢白僵菌灭活溶液 将2×106个/mL球孢白僵菌溶液置于高压蒸汽灭菌器内，121℃灭菌20 min，即为灭活溶液。

1.4 球孢白僵菌对羊角月牙藻生长影响的预试验

预试验的目的是找出球孢白僵菌对羊角月牙藻生长抑制和生物量抑制率降低50%时的浓度范围。

从图1可以看出，2012—2016年青岛市的人口城市化率均为60%～75%，因此2012—2016年青岛市的工业化发展水平进入工业化后期。

分别取50 mL配制好的2×105个/mL、2×106个/mL和灭活的球孢白僵菌溶液(2×106个/mL)于灭菌的300 mL三角瓶中，再分别加入50 mL羊角月牙藻溶液(浓度为2×104 个/mL)，即得到浓度为1×105个/mL、1×106个/mL的处理和灭活对照试验溶液，同时设置空白对照，共4个处理，每处理3次重复。将配置好的试验溶液置于恒温震荡光照培养箱内培养(光暗周期12 h∶12 h，光照强度4 400～8 800 lx，温度(23±2)℃，震荡频率120 r/min)，在培养24 h、48 h、72 h和96 h时观察并记录羊角月牙藻细胞生长量和藻细胞生长形态，计算藻类生物量的增长抑制百分率(IY)和藻类生长抑制百分率(Ir)。

1.5 球孢白僵菌对月牙藻生长影响的毒性试验

根据预试验结果设置毒性试验的浓度范围，以1.6倍间距设置梯度试验。

分别取2×105个/mL、3.2×105个/mL、5.2×105个/mL、8.2×105个/mL和1.32×106个/mL的球孢白僵菌溶液50 mL于300 mL三角瓶中，再分别加入50 mL羊角月牙藻溶液(浓度为2×104个/mL)，即得到浓度为1×105个/mL、1.6×105个/mL、2.6×105个/mL、4.1×105个/mL和6.6×105个/mL的试验溶液，同时设置空白对照，每处理3次重复，按1.4中的培养条件培养。在培养24 h、48 h、72 h和96 h时观察并记录羊角月牙藻细胞生长量和藻细胞生长形态，计算藻类生物量的增长抑制百分率(Iy)和藻类生长抑制百分率(Ir)。

BIM技术作为一种用于建筑工程施工、设计以及后期整体工作管理的信息模型技术，其在实际进行运用时，具有显著可视化、协调性与模拟性的使用特点，使得其能够将建筑工程全过程做到精细化的项目管理，进而避免建筑工程出现建设质量低与效率不高的情况。目前在BIM技术的进一步推进与发展下，BIM技术在建筑工程中的应用日益广泛，而合理利用BIM技术进行建筑过程项目管理，也利于推进建筑工程向着精细化管理的方向进行转变。对此，为促使BIM技术能够在建筑工程全过程精细化项目管理中，发挥有效的作用与优势，本文主要切实于BIM技术的应用角度进行了相关探析。

1.6 数据统计

μi-j=(InXj-InXi)/(tj-ti)

Iy=(Yc-Yt)/Yc×100%

(1)

式中,Iy 为处理生物量增长的抑制率，Yc为空白对照的单位生物量(个/mL)；Yt为处理单位生物量(个/mL)。

藻类生长抑制率：

Ir=(μc-μt)/μc×100%

(2)

Ir 为生长抑制率，μc为空白平均生长率，μt 为处理平均生长率；μ按(3)式计算：

阿尔泰等奏，小金川土舍围攻沃克什，请临以兵威，以挫其气，一摺所见甚是，已于摺内批示矣。蛮夷自相仇杀，虽属常情，不值烦我兵力，但小金川去岁与沃克什构衅，占据其地，经阿尔泰等亲往饬。谕业已遵奉退还，乃为日无几，复敢称兵侵扰，似此怙恶不悛，非复可以理喻。且现在金川与革布什咱之事尚未办完，而小金川又复效尤滋事，此而不加以惩创。[5]893

藻类生物量抑制率：

(3)

式中：μi-j 为时间点i～j的平均生长率；Xi为时间点i的藻生物量，Xj 为时间点j的藻生物量，均用细胞数表示(个/mL)。

但是很多海鲜菜品是会用到食醋的，例如糖醋味、茄汁味（只用番茄酱，成菜酸味不足，需要再加入一定量的白醋增酸）的海鲜菜。

从表3看出，对照组的藻细胞浓度在试验开始后的72 h内增加了95倍。试验后96 h时，1×105个/mL球孢白僵菌处理对羊角月牙藻的生长抑制率为6.4%，生物量抑制率为31.7%；6.6×105个/mL处理对羊角月牙藻的生长抑制率为70.4%，生物量抑制率为98.5%，羊角月牙藻细胞几乎不能正常生长。试验数据经分析(SPSS分析-回归-probit)得到：试验后24 h球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率降低50%时的浓度为9.6×105个/mL，其95%置信区间为6.9×105～1.7×106个/mL；试验后48 h球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率降低50%时的浓度为4.8×105个/mL，其95%置信区间为4.2×105～5.5×105个/mL；试验后72 h球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率降低50%时的浓度为3.4×105个/mL，其95%置信区间为2.0×105～8.7×105个/mL；试验后96 h球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率降低50%时的浓度为3.2×105个/mL，其95%置信区间为2.9×105～3.7×105个/mL(表4)。由分析结果可知，球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率和生物量抑制率降低50%时的浓度范围在1×105～6.6×105个/mL，与预试验结果较为吻合。此外，试验后96 h，溶液pH圴上升，1.6×105～6.6×105个/mL处理组藻细胞形态均有不同程度变小、异形和粘连式聚集现象(表5)，这有可能是因为培养基中部分球孢白僵菌孢子包附于藻细胞上，孢子与孢子之间互相连接成团，使藻细胞与培养基以及光照不能够充分接触，从而导致藻细胞营养供给不足或短缺造成。

胫骨多段开放性骨折通常由高能量的直接创伤所致，常合并严重软组织损伤［3］。这种特殊类型的骨折存在一个不稳定的中间骨折段，并且该骨折段往往存在软组织的自动剥离［4］，血供破坏较重，常发生骨折延迟愈合甚至不愈合，其治疗是创伤骨科的一个难题［5］。对胫骨多段开放性骨折，最重要的治疗原则是在彻底清创后，稳定骨折断端，最大可能的保护骨折断端血供，重建软组织，创造有利于骨折愈合的生物学环境。

2 结果与分析

2.1 预试验羊角月牙藻的生长情况

从表1看出，试验72 h时，空白对照组的藻细胞浓度增加了113倍。试验96 h时，1×105个/mL处理组对羊角月牙藻的生长抑制率为2.3%，生物量抑制率为29%。1×106个/mL处理组对羊角月牙藻的生长抑制率为93.1%，生物量抑制率为99.7%，此时，羊角月牙藻细胞几乎不能正常生长。可见，可在1×105～1×106个/mL浓度范围设置毒性梯度试验。此外，1×106个/mL灭活对照组96 h对羊角月牙藻的生长抑制率为99.7%，生物量抑制率为99.6%，藻细胞几乎无法生长，这可能是因为球孢白僵菌在121℃灭菌过程中发生碳化，失活变成黑色有机质颗粒，使得光照无法与羊角月牙藻细胞接触，从而导致羊角月牙藻细胞因不能正常进行光合作用而无法生长，也有可能是在球孢白僵菌灭菌过程中碳化产生了其他具有抑制藻细胞生长的物质，进而阻止藻细胞的分裂、抑制藻类的生长速率和降低酶的活性。

硅质岩中的Al2O3和TiO2可用于判别大陆边缘沉积环境，Fe2O3可反映大洋中脊组分的影响强度[3]。样品中SiO2/Al2O3比值为9.82～62.43，比纯硅质岩(SiO2/Al2O3比值为80～1400)低很多，SiO2/Al2O3比值和Al2O3呈较好的负相关关系(图2b)，且TiO2含量为0.026%～0.386%，Al2O3/TiO2比值为14.69～73.83，与Al2O3具有较好的正相关关系，均表现为富铝特征，表明研究区有陆源碎屑沉积物[16]。

表1 预试验各处理羊角月牙藻藻细胞的生长量及抑制率

Table 1 Growth and inhibition rate of S. capricornutum cells under different B. bassiana concentration in a preliminary test

  

球孢白僵菌浓度(个/mL)B．bassianaconcentration藻细胞数量(1×104个/mL)S．capricornutumcells0h24h48h72h96h96h抑制率(%)Inhibitionrateafter96hIrIy空白对照(CK)15．1725．13113．00501．00001×10515．2625．00110．67351．502．3291×10611．141．171．481．5793．188．2灭活对照InactivationCK11．571．762．742．0999．799．6

表2 预试验各处理羊角月牙藻的细胞形态

Table 2 Morphology of S. capricornutum cells under different B. bassiana concentration in a preliminary test

  

球孢白僵菌浓度(个/mL)B．bassianaconcentrationpH0h96h藻细胞形态MorphologyofSelenastrumcapricornutumcell24h48h72h空白对照(CK)8．068．99AAA1×1058．048．94AAA1×1068．098．44BBBC灭活对照InactivationCK8．148．34BBBC

注：A细胞形态正常，B细胞变小，C细胞异形，D细胞颜色改变，E细胞粘连式聚集，下同。

Note: A. Normal, B. Smaller, C. Abnormal, D. Color variation, E. Aggregation. The same below.

从表2看出，试验后溶液pH值均增大，72 h时1×106个/mL球孢白僵菌处理和灭活对照组藻细胞形态有变小、异形的现象，可能是因为球孢白僵菌分散的部分孢子吸附于藻细胞上，使藻细胞与培养基的接触不充分，导致藻细胞营养供给不足所致。

2.2 毒性试验羊角月牙藻的生长情况

毒性试验的EC50以及95%置信限用SPSS16.0计算。于试验的0 h和96 h测定溶液的pH值。

开挖前，需保证施工区域土层密实平整，稳定性好，周边施工空间无障碍物，悬吊机具的钢丝索必须在导墙中心线上成垂直状态，不能松弛，才能保证成槽垂直精度，待确保施工区域土层稳定后，以最小角度定位。

表3 毒性试验各处理羊角月牙藻藻细胞的生长量及抑制率

Table 3 Growth and inhibition rate of S. capricornutum cells under different B. bassiana concentration in a toxicity test

  

球孢白僵菌浓度(个/mL)B．bassianaconcentration藻细胞数量(1×104个/mL)S．capricornutumcells0h24h48h72h96h96h抑制率(%)Inhibitionrateafter96hIrIy空白对照(CK)14．7922．3395．07386．00--1×10514．1220．6086．67263．676．431．71．6×10513．8217．6021．4080．2326．479．22．6×10513．6410．6713．6024．6046．293．64．1×10513．175．306．058．1964．797．96．6×10512．353．154．045．8770．498．5

 

表4 毒性试验各处理的EC 50和95%置信区间

 

Table 4 EC50 and 95% confidence interval of different treatments in a toxicity test

  

球孢白僵菌浓度(个/mL)B．bassianaconcentration藻细胞生长情况(1×104个/mL)GrowthofS．capricornutumcells24h48h72h96hEC509648343295%置信区间95%confidenceinterval69～17042～5520～8729～37

 

表5 毒性试验各处理羊角月牙藻细胞形态

 

Table 5 Morphology of S. capricornutum cells under different B. bassiana concentration in a toxicity test

  

球孢白僵菌浓度(个/mL)B．bassianaconcentrationpH0h96h藻细胞形态MorphologyofS．capricornutumcell24h48h72h96h空白对照(CK)8．049．04AAAA1×1058．099．02CCCC1．6×1058．118．98CCCC2．6×1058．168．76CCCC4．1×1058．238．53CECECEBCE6．6×1058．278．47CECECEBCE

3 结论与讨论

[6] 卜元卿, 单正军, 李振高, 等. 东苕溪流域上游地区典型农田土壤滞留功能风险评价[C].中国毒理学会第六届全国毒理学大会论文摘要,2013.

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立春仪 立春是二十四节气之一，又能 称“打春”。传统习俗以立春为春季的开始，达斡尔族对其很重视，这一天家家户户要吃春饼，俗称 “咬春”。还要给耕牛的犄角涂抹红色，表示立春见喜，希望耕牛在春耕中多出力，秋天有好的收成。

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[10] 徐延平.防治小菜蛾的球孢白僵菌新型可湿性粉剂研究[D].合肥：安徽农业大学, 2012.

500亿孢子/g球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长有一定的抑制作用，即随着球孢白僵菌浓度的递增其抑制作用逐渐加强，具体表现在羊角月牙藻的细胞数量和大小上。在球孢白僵菌浓度为1×105个/mL作用下，与空白对照组相比，藻细胞能够正常生长，细胞健壮无异常。在球孢白僵菌浓度以1.6倍间距依次递增过程中，藻细胞数量逐渐减少，当球孢白僵菌浓度增加到1×106个/mL时，藻细胞几乎不能正常生长，且藻细胞出现了不同程度的变小、异形和粘连式聚集现象。因此，毒性试验在1×105～1×106个/mL浓度范围设置梯度试验，在1.6×105～2.6×105个/mL浓度范围内，藻细胞出现了异形现象，随着浓度增加(4.1×105～6.6×105个/mL)藻细胞出现了变小和粘连式聚集现象。此外，在0～96 h的时间段内，试验溶液的pH值随着藻细胞数量的减少逐渐降低，这有可能是由于藻细胞数量多的溶液中藻细胞的呼吸作用加强，产生的较多二氧化碳溶于培养基造成的。灭活的球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长也有较高的抑制，在试验后96 h，灭活的球孢白僵菌对羊角月牙藻的生长抑制率为99.7%，生物量抑制率为99.6%，藻细胞几乎无法生长。因此，在实际应用和生产球孢白僵菌过程中，将球孢白僵菌灭活后直接排入水体也不可行。毒性试验结果表明， 96 h球孢白僵菌的EC50浓度为3.2×105个/mL，其95%置信区间为2.9×105～3.7×105个/mL，毒性试验数据可为水生生物中球孢白僵菌的施用量提供试验依据。

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2.缺乏完善的财务风险内部管理制度。目前我国企业内部仍然存在财政管理系统不完善的情况，因此不利于企业内部财政风险的控制和管理。另外，企业财政管理方面涉及到资金管理、权责制等方面的规定没有相关的规定和政策，因此会对企业产生较大的损失，不利于企业的发展。

[5] 陈 源，卜元卿, 单正军.微生物农药研发进展及各国管理现状[J].农药, 2012, 51(2): 83-89.

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这个读书法有着鲜明的儒学特色，贯彻了儒学所强调的“学以成人”和“经世致用”思想，这也是与孟子提倡的士人“穷则独善其身，达则兼济天下”的社会存在方式是相对应的。到了明代，从小学（明代叫社学）开始，到科举求官，以朱熹《四书章句集注》为教科书，读书的过程是“证诸先觉，考诸古训，尊所闻，行所知”的历程，从小就开始这样反复训练，“日以义理浸灌其心”，长大了自然就可以达到使“心术归于正”的目标了。

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翻耕以机械作业为佳，既能切断霉变及残弱鞭，也能将嫩鞭梢头切除，又不伤及壮龄鞭，可以避免人工翻耕时表层竹鞭被“一刀切”的做法，使壮龄鞭能够提早萌芽、出笋。材用林翻垦前最好将毛竹伐桩进行清理，既可以用机器打孔粉碎，也可进行人工挖掘清理；同时用锄头清理跳鞭、浮鞭、过桥鞭，以减轻机器翻耕时的劳动强度。

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