烟草粉斑螟Ephestia elutella(鳞翅目：螟蛾科)又称烟草粉螟，是重要的世界性储烟害虫(Genève, 1996)。其危害涵盖新烟到卷烟成品的整个生产环节，从20世纪开始就广布于世界各大烟产区(U.S.D.A., 1971)。由于现代卷烟工业中烟叶醇化时间较长，导致害虫对烟叶的危害不断加剧，在一些发生严重的年份，烟草粉斑螟危害率甚至高达27%(王玮, 2017)。烟草粉斑螟的直接危害主要表现在取食醇化后烟叶，烟叶碎屑及褐色虫粪将直接影响烟叶的商品价值。而遭受烟草粉斑螟为害的烟叶易发生霉变，也会导致间接损失(林阳武等, 2015)。

天脊集团不断加强销售队伍建设，对销售人员和农化服务人员定期组织专业培训，提高了服务技术水平。直接为用户提供通俗易懂的科学种植知识，让用户直接体验科学施肥所带来的丰收喜悦。

目前，烟草粉斑螟的防治方法主要包括化学熏蒸和生物防治(王纬, 2017)。在生物防治方面，已有保幼激素类产品KabatR(Ryan, 1995)，致病细菌类产品苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(郑宪滨, 2000)，以及虫生真菌球孢白僵菌Beauveria bassiana等(刘爱英等, 2008)。但总体而言，化学熏蒸依旧是烟草工业采用的主要防护方法，生物防治目前还只是烟叶储存养护的一种附加手段，还有很大的研究提升空间。而昆虫激素类产品与细菌类产品是否会通过烟叶被人所吸收并产生影响一直是烟草从业人员所担忧的因素之一，虫生真菌通过表皮入侵昆虫并造成昆虫的死亡，不需要昆虫对其进行取食。另外许多虫生真菌的有性型阶段为虫草属真菌(Kepler et al., 2017)，在烟草的使用上表现出先天的优势。因此，虫生真菌在烟草行业的生物防治领域的应用更加受到重视。目前对烟草粉斑螟有致病效果的虫生真菌资源还相对较少。

常规模块级联型电力电子变压器采用了级联H桥（Cascaded H-bridge，CHB）和隔离双向 DC/DC变换器（Isolated Bidirectional DC/DC Converter，IBDC）结构来采用低耐压器件实现高电压输出，最大优点在于可以方便进行模块化扩展。但常规电力电子变压器拓扑整流环节多采用PWM调制，器件开关频率高，开关损耗大，控制策略相对较复杂。

蜡蚧菌Lecanicillium(常被称作蜡蚧轮枝菌)是已经被商品化的虫生真菌。除了对昆虫的致病性之外，蜡蚧菌对土壤线虫、节肢动物也具致病性，且还能抑制某些植物病原真菌(Kim and Kim, 2008)。因此，从资源的获取角度来看，传统的从野外的昆虫罹病尸体上分离并不是其唯一的方式，土壤(特别是植物根际土壤)将是一个重要的蜡蚧菌分离对象。例如除了从潜叶虫Cameraria and Kaergius, 2012)和蜘蛛(Manfrino et al., 2017)上分离到丝枝蜡蚧菌Lecanicillium aphanocladii外，也有学者从土壤中分离得到丝枝蜡蚧菌(董璇等, 2016)。

国外基于蜡蚧菌已开发的或正在研发的商品化制剂至少有15种，已用于多种害虫的防治，而国内的研究还比较少(Tian et al., 2017)。作者在对贵州省森林中的根际土壤进行真菌资源调查时，发现并分离到一种能够产生红色素的蜡蚧菌属菌株。本研究对该菌株进行了包括形态与分子系统学综合分类，并与其他虫生真菌菌株一起测试了对烟草粉斑螟的致病性，以评价其在此害虫生物防治中的价值。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫

试验所用烟草粉斑螟采自贵州中烟工业有限责任公司仁怀市坛厂镇储烟仓库，选取头宽基本一致的烟草粉斑螟3龄幼虫进行试验。

1.2 供试菌株

Kumar S, Tamura K, Nei M, 2004. MEGA3: integrated software for molecular evolutionary genetics analysis and sequence alignment. Brief. Bioinform., 5(2): 150-163.

1.3 菌株的分离与培养

参照韩燕峰等(2013)从土壤中分离真菌的方法进行。菌株GZUIFR-lun1505分离自贵州省贵定县松林下土壤，现保存于贵州大学真菌资源研究所菌种保藏中心(GZAC)。25℃培养7 d后观察菌落特征并镜检其产孢结构和分生孢子。为探究该菌的极限生长环境，将其分别放入4℃冰箱与30～40℃的高温培养箱中进行培养，高温培养箱每2℃设置一个处理。PDA培养基、马丁氏培养基均参照沈萍等(2007)。

2.1.1 正常胎儿 三血管-气管切面显示主动脉横弓与动脉导管呈“V”字形共同汇入降主动脉，上腔静脉与气管均位于主动脉横弓的右侧，上腔静脉在前，气管在后。

蜡蚧菌属真菌除了被开发成生物杀虫剂用来防治农业害虫之外，还有着被开发成“植物综合保护剂”的潜力(Kim and Kim, 2008)。例如，在棉花上施用蜡蚧菌属产品“Vertalec”既能控制蚜虫的数量，同时能减少白粉病的危害，达到“一药两治”的目的(Goettel et al., 2008)。丝枝蜡蚧菌作为植物内生菌已在玉米植株上分离得到(Rijavec et al., 2007)。如果该类菌株既能防治烟草粉斑螟又能抑制烟叶等储藏物霉变，从而具有双重生态功能，将促进虫生真菌资源在仓储生态微生物控制领域的应用。

1.4 DNA的提取及ITS序列扩增

参照邹晓等(2016)的操作方法，送上海Invitrogen公司纯化测序。

1.5 系统发育分析

采用NCBI的Blast程序进行比对，下载相似度大于90%的ITS序列以及该属中其他真菌的ITS序列。所用序列的菌名、登录号见图2，以Rotiferophthora minutispora作为外群。用ClustalX 1.83进行序列比对、手工校对后，用MEGA 5.2 Neighbor-Joining法经1 000次Bootstrap验证，构建系统发育树(Kumar et al., 2004)。

1.6 生物测定

Kepler RM, Luangsa-ard JJ, Hywel-Jones NL, Quandt CA, Sung GH, Rehner SA, Aime MC, Henkel TW, Sanjuan T, Zare R, Chen M, Li ZZ, Rossman AY, Spatafora JW, Shrestha B, 2017. A phylogenetically-based nomenclature for Cordycipitaceae (Hypocreales). IMA Fungus, 8(2): 335-353.

采用浸虫法(刘爱英等, 2008)，将试虫分别放入孢子悬液中5 s后捞出，放在灭菌的滤纸上吸干虫体表面的水分。在灭菌的平板中放入干燥的烟叶，并将处理后的试虫放在烟叶上。用保鲜膜将平板四周封口，并在保鲜膜上扎均匀的小孔以透气。恒温25±1℃保湿(RH 80%)培养。每个处理30头，重复3次，以灭菌的0.05% Tween-80溶液为对照。24 h之后开始记录死亡的虫数并及时将死亡的烟草粉斑螟放在灭菌的载玻片上进行保湿培养。

1.7 统计分析

Kim JJ, Kim KC, 2008. Selection of a highly virulent isolate of Lecanicillium attenuatum against cotton aphid. J. Asia-Pac. Entomol., 11(1): 1-4.

校正死亡率(%)=

 

2 结果

2.1 菌株Gzuifr-lun1505的形态鉴定

菌落在PDA培养基中生长较快(图1)，25℃下生长6 d直径达到27 mm，绒毛状，白色，常产生淡红色色素，4℃生长缓慢，超过40℃停止生长。产孢细胞直接自匍匐的菌丝上长出，单生，对生或轮生，6.3～9.0 μm×0.9～1.8 μm。孢子单生，卵形，3.6～5.4 μm×1.8～2.7 μm。该菌株的菌落颜色、分生孢子梗以及分生孢子形态均与丝枝蜡蚧菌L. aphanocladii Zare & W. Gams(Zare and Gams, 2001; 董璇等, 2016)基本一致(表1)。

 

2.2 菌株Gzuifr-lun1505的分子鉴定

基于ITS1-5.8S-ITS2 rDNA构建的相关蜡蚧菌系统发育树表明，该属为单源发生，这与Zare和Gams(2001)采用ITS、大亚基及小亚基共3个rDNA基因序列获得的系统发育结果基本一致。根据系统发育树(图2)显示的结果来看，所用的蜡蚧菌属的不同种能很好地区分。同种的不同菌株从遗传距离上并无差异，来源不同的两个Lecanicillium attenuatum以73%聚在一起。菌株Gzuifr-lun1505以90%支持率与L. aphanocladii聚在一起，且与其他蜡蚧菌明显区分。因此，综合形态特征和分子系统学分析，菌株Gzuifr-lun1505被鉴定为丝枝蜡蚧菌Lecanicillium aphanocladii Zare & W. Gams。

设图2中的方阵是一个3阶幻方，a，b，c，d，e，f，g，h，i分别代表幻方中的9个数，幻方常数设为S.我们有S=3e.我们考虑第二行、第二列以及两条对角线之和，可以得到：

 

表1 蜡蚧菌菌株Gzuifr-lun1505与丝枝蜡蚧菌形态特征比较Table 1 Morphological comparison between Lecanicillium sp. Gzuifr-lun1505 and L. aphanocladii strains

  

菌株Strain菌落Colonies产孢结构Conidiogenous cell分生孢子Conidia 文献来源ReferencesL. aphanocladiiCBS165.45白色, 背面紫红色White, while red, reddish white tocream-coloured at the reverse side4.5-11 μm×1.0-1. 8 μm卵圆至近球形状Oval to sub-globose,2.7-4 μm×1.5-2.2 μmZare et al., 2001L. aphanocladiiGzuifr.SP477白色, 背面鲜红色White, while bright red atthe reverse side5.5-10 μm×1.5-1.8 μm卵圆至长椭圆Oval to long ellipsoid,2.5-6.0 μm×1.8-2.2 μm董璇等, 2016Dong et al., 2016L. sp. Gzuifr-lun1505白色, 背面淡红色White, while light red atthe reverse side6.3-9.0 μm×0.9-1.8 μm卵形Oval, 3.6-5.4 μm×1.8-2.7 μm本研究This study

 

2.3 菌株Gzuifr-lun1505对烟草粉斑螟3龄幼虫的致病性

处理7 d后在吐温(对照组)中烟草粉斑螟3龄幼虫平均死亡率为14.4%。在供试的菌株中，环链棒束孢、球孢白僵菌、丝枝蜡蚧菌在孢子浓度为1×107个/mL时对烟草粉斑螟幼虫的致死效果都较优，渐狭蜡蚧菌相较其他菌株效果较差。处理3和5 d时丝枝蜡蚧菌(Gzuifr-lun1505)并没有球孢白僵菌与环链棒束孢的致死率高，但7 d的致死率与最优的环链棒束孢菌株S-22相当。而从校正死亡率来看，烟草粉斑螟幼虫在丝枝蜡蚧菌与环链棒束孢、球孢白僵菌处理3, 5和7 d时的校正死亡率差异均不显著(表2)。烟草粉斑螟幼虫被丝枝蜡蚧菌感染后，逐渐从灰色变成褐色，保湿培养约10 d后，白色的菌丝从烟草粉斑螟长出并产生分生孢子(图3)。

赣南灯彩文化是我国灯彩文化中最具特色且最为久远的文化之一。在产业文化理念下，赣南灯彩文化的发展策略应做出适当的调整。实现资源的充分开发和利用，并实现灯彩艺术与当代文化的结合，使灯彩文化能够适应现代旅游需求，促进其发展。

 

表2 供试菌株对烟草粉螟3龄幼虫的致死率(%)比较Table 2 Comparison of the influence of the test strains on the mortality rate (%) ofthe 3rd instar larvae of Ephestia elutella

  

菌株Strain1 d3 d死亡率Mortality校正死亡率Correctedmortality死亡率Mortality校正死亡率Correctedmortality球孢白僵菌Beauveria bassiana (GL-5)0 a1.11±1.92 a22.00±5.09 b19.54±5.27 b环链棒束孢Isaria cateinannulata (S-22)1.11±1.92 a 1.11±1.92 a40.00±5.77 a37.93±5.97 a渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum (Gzuifrlun-1404)0 a0 a18.89±1.92 b16.09±1.99 b丝枝蜡蚧菌Lecanicillium aphanocladii (Gzuifrlun-1505)1.11±1.92 a1.11±1.92 a26.67±5.77 b24.14±5.97 abTween-80 (CK)0 a-3.33±3.33 c-菌株Strain5 d7 d死亡率Mortality校正死亡率Correctedmortality死亡率Mortality校正死亡率Correctedmortality球孢白僵菌Beauveria bassiana (GL-5)64.44±12.62 a54.22±13.68 a73.33±12.01 b64.94±14.05 ab环链棒束孢Isaria cateinannulata (S-22)65.56±11.71 a62.65±12.69 a82.22±7.70 a79.22±8.99 a渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum (Gzuifrlun-1404)26.67±3.33 c20.48±3.61 b54.44±7.70 c46.76±8.99 b丝枝蜡蚧菌Lecanicillium aphanocladii (Gzuifrlun-1505)42.22±6.94 b37.35±7.52 ab81.11±6.94 ab77.92±8.11 a7.78±3.85 d-14.44±8.39 d-

表中数据为均值±标准差;同一列数据后具不同字母表示差异显著(Tukey氏检验，P<0.05)。The data in the table are mean±SD, and those in the same column with different letters are significantly different (Tukey’s test, P<0.05).

 

3 讨论

在利用微生物防治烟草粉斑螟的实践中，除了应用较早的苏云金芽孢杆菌(Blanc et al., 2002)外，对此害虫有致病效果的虫生真菌资源还相对较少。本研究从根际土壤分离到了一株蜡蚧菌，经鉴定为丝枝蜡蚧菌；而且，生测结果表明其可能具有应用于生防的价值。在仓库中，温度相对较高而湿度较低，这明显不同于本研究中采用的25±1℃、RH 80%恒温恒湿的生测条件，故丝枝蜡蚧菌能否在仓库环境中有效控制烟草粉班螟种群数量还需进一步研究。本研究中除了筛选得到的丝枝蜡蚧菌外，环链棒束孢也同样为仓储中的烟草粉斑螟的防治提供了新的种质资源。

小儿腹泻的治疗原则:预防脱水、纠正脱水、继续饮食、合理用药。防止脱水是第一位的。此外，抗生素只能对付细菌性腹泻，而腹泻的因素有很多，细菌、病毒、过敏、消化不良等。大便化验结果中的少量白细胞和脓细胞，原因可能是多方面的，并不代表就是细菌感染，暂时不要使用抗生素。

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基于结构光投影的光学三维传感技术被广泛应用于生产、生活中的诸多领域[1]，如工业元件检测、虚拟现实、3D打印、生物医学、人脸识别等.相关测量技术可以分为基于三角测量原理的三维传感和基于垂直测量原理[2-4]的三维传感.

孢子悬液制备：孢子洗脱液选用灭菌的0.05% Tween-80溶液(邹晓等, 2008)。用接种针刮取培养好的分生孢子置于洗脱液中并充分震荡，3层擦镜纸过滤。将过滤后的孢子悬液用洗脱液调整到1×107个/mL。

企业先行的网络机制依然处于初始建设阶段，和海外发达国家大型企业的建设发展相比，我国企业不管是在内部体系的构建或者是科技化条件水平上都存在着很大的局限性，这就容易使企业在开展数据收集时容易受到阻碍，其收集到的资源、信息、数据等并不完整，只能对一些信息进行加工处理。在大部门时候，企业财务内控系统在向管理层、领导层反馈信息时，只会反映出财务工作者获得到的数据情况，但是这些片面的数据无法精准地反映出企业在生产经营中的实际情况，从而使财务信息开始出现一致性、真实性的问题，企业的财务信息化发展也难以发挥出其应有的作用。

用Excel 2010对实验数据进行统计，以平均值±标准差(mean±SD)表示。通过DPS 7.0对不同菌株的死亡率进行差异显著性分析(Tukey氏测验，P=0.05)，方差分析之前，先将百分率数据进行反正弦平方根转换。以Abbott公式计算校正死亡率：

球孢白僵菌Beauveria bassiana (GZUIFR-GL5)、环链棒束孢Isaria cateinannulata (GZUIFR-S22)、渐狭蜡蚧菌Lecanicillium attenuatum (GZUIFR-lun1404)、蜡蚧菌Lecanicillium sp.菌株GZUIFR-lun1505。以上菌株经贵州大学真菌资源研究所鉴定保存。

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病虫害是农业种植中必须注意的部分，也是玉米高产栽培技术推广过程中需要进行配套推广的内容，推广工作人员需要针对所选玉米品种进行病虫害防治内容的筛选，例如某山区多发玉米丝黑穗病和玉米螟，玉米种植过程中需要进行相应的药物处理和施用，用粉锈宁、萎锈灵、速保利、氧环宁缓释剂、多菌灵可湿性粉剂等对玉米的拌种都可以达到防治的好效果，玉米喇叭口期用苏云金杆菌300ml兑水50kg进行喷雾可以有效抑制玉米螟，因此玉米病虫害并不可怕，只要采取了合适的防治手段，就可以得到有效抑制，可以成为玉米高产栽培技术推广应用的有效辅助手段。

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进入实验室的每一个人都要树立安全第一的思想，实验小组负责人要全面负责实验的安全，任何实验都要有防火防水和防事故的安全措施；如果有正在运行中的仪器设备，实验人员不得离开现场等。在此基础上，每个实验人员根据自身的实际情况，在导师的指导下建立具体的安全制度。如在准备实验之前需要全面了解实验原理，明确实验风险，并制定稳妥的风险应对措施。在实验过程中有任何隐患都需暂停实验，在与团队成员和指导教师进行讨论确定后，在有安全防护措施的前提下才可以继续开展实验，为学生的创新能力培养和实验开展建立充分的安全保障[1]。

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