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介绍噬菌体抗体库技术的论文文献

发布时间:2024-07-01 18:43:28

介绍噬菌体抗体库技术的论文文献

噬菌体(phage)是侵袭细菌的病毒,也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生,有严格的宿主特异性,其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方,如:泥土、动物的肠道里,都可以找到噬菌体。

第二章 抗体制备技术 抗体的基本概念:多克隆抗体(多个淋巴细胞克隆所分泌的抗体)和单克隆抗体(单个B淋巴细胞克隆所分泌的抗体) 单克隆抗体的特点: 高度均质(同一亚类),化学组成均一,不含或很少含Ig 特异性强,只针对某一种抗原表位 亲和力强 抗原用量少,无须纯化 无批间差异 来源稳定,可达批生产,容易标准化 不易形成沉淀线 操作比较麻烦 什么条件下需要制备单抗: 目的蛋白有类似的结构 抗原不纯,无法分开 多抗的效果不好(已经排除非特异性反应) 希望将抗体用于治疗,研制成药物 希望将抗体用于诊断,研制成诊断试剂。第一节   多克隆抗体的之别 一、多克隆抗体制备的原理 抗体制备、动物免疫、抗体纯化 二、多抗的基本条件 1.   免疫原的制备 颗粒性抗原:细胞、病毒、细菌等,一般具有较强的免疫原性,可以不加佐剂,直接进行腹腔注射。 可溶性抗原:可溶性抗原的来源主要是天然纯化,或者用目的基因在原核细胞或者真核细胞中表达,可溶性抗原需要与弗氏佐剂完全或不完全混匀,才可以进行免疫。 (1) 完全抗原的提取:细胞破碎法、抗原提取、抗原的纯化 (2)半抗原与载体的交联:载体的选择、半抗原与载体偶联的方法、偶联复合物的鉴定 (3)合成肽抗原:免疫原性肽的选择、肽的合成和纯化 2. 免疫动物的选择: 3.   佐剂的准备: 佐剂的种类:无机佐剂、有机佐剂、合成佐剂、油剂 三、多克隆抗体制备的基本方法 1.  抗原计量、免疫途径与免疫日程 免疫动物的方法: 免疫原值被: 无佐剂免疫法:适用于颗粒性抗原 弗氏佐剂免疫法:适用于可溶性抗原 铝佐剂免疫法:适用于人的免疫 免疫动物(一般选择雌性动物,温顺并且可以生产) 皮内免疫法 皮下或肌肉免疫法 淋巴结免疫法 混合法 抗体效价满意后静脉注射加强免疫 常见的注射方法;皮下注射、皮内注射、尾静脉注射、静脉注射 2.   小样试血与采血 抗血清的获得:眼眶取血、颈动脉放血、心脏采血 免疫效果评价:取血(兔耳动脉、鼠尾静脉)、检测(双向免疫扩散、ELISA) 3.   抗体的分离和纯化技术 盐析法、凝胶过滤法、离子交换层析、亲和层析法、电泳分离法 亲和层析法原理:利用蛋白质之间的特异性结合(抗原-抗体、受体-配体)将一种配基与凝胶颗粒结合,捕捉与他相配的物质,洗脱另外一种物质,并且洗脱一般用改变pH的方法。 主要步骤:将蛋白质与活化柱子结合,将腹水或者血清处理后过柱子,用结合缓冲液洗柱子(知道A280为零),永安氨酸缓冲液洗脱抗体,等量收集洗脱液,测定洗脱液的A280值,保留A280值明显升高的样品。 4.   抗体的鉴定 蛋白质浓度的测定:紫外分光比色法、双缩脲法、福林酚法、 免疫效果评价:双向免疫扩散、ELISA 纯度分析:免疫印迹(WB) 抗体类别分析:免疫金试条 亲和力分析:ELISA、荧光偏振 5.  抗体的保存 抗体的浓缩:吸收、蒸发、超滤 抗体的保存:浓缩抗议+甘油+防腐剂免疫效果不佳的原因可能是:抗原纯度不够、免疫原性低、免疫途径乳化不合格、免疫剂量不合适、动物疾病或者种属差异小。第二节  单克隆抗体制备技术 一、单克隆抗体制备的原理 1个B细胞只能产生1个抗体。方法是细胞工程杂交技术和B细胞杂交瘤技术 需要将单克隆B细胞和肿瘤细胞相结合才可以永久产生单抗 Barski等发现细胞额自然融合现象,但是频率很低 冈田等发现灭火的仙台禀赋和聚乙二醇能显著提高细胞融合的效率。 二、单抗制备的基本条件 需要培养正常的B细胞以及B细胞融合的肿瘤细胞 1.   动物的免疫抗原与载体、动物的选择、免疫途径 举例:小鼠免疫 第一次免疫:可溶性抗原加弗氏完全佐剂——小鼠背部皮下注射(4周后) 第二次免疫:可溶性抗原加弗氏不完全佐剂——小鼠背部皮下注射(3周后) 第三次免疫:可溶性抗原加生理盐水——小鼠腹腔注射(10天后检测血清效价) 加强免疫:可溶性抗原加生理盐水——小鼠腹腔注射(3天后) 细胞融合 2.  酶缺陷型骨髓瘤细胞的培养 细胞DNA合成途径: 次黄嘌呤(H)通过嘌呤合成跑路途经合成HGPRT(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)进一步合成鸟嘌呤核苷酸 胸腺嘧啶核苷(T)通过嘧啶合成旁路途经合成TK(胸腺嘧啶核苷激酶),进一步合成胸腺嘧啶脱氧核苷酸 氨基酸、谷氨酰胺、鸟核苷单磷酸通过核酸生物合成主要途径结合上面两步合成的鸟嘌呤核苷酸以及胸腺嘧啶脱氧核苷酸形成DNA 将第三步当中氨基端变为氨基碟呤(A),则无法形成DNA。 因此酶缺陷型细胞的筛选就是HAT筛选 3.   单抗检测方法的建立 免疫酶技术 免疫荧光技术 免疫扩散技术 三、单抗制备的基本方法 1.   酶缺陷型骨髓瘤细胞的培养 组织培养的基本条件: 仪器:包括CO2培养箱、倒置显微镜、超净台、液氮罐、低速低温离心机 试剂:培养液、HAT选择培养液、HT培养液、血清、抗生素 耗材:培养板、培养品、吸管、移液管 骨髓瘤细胞系的选择要点: (1)  所选的骨髓瘤细胞应与提供免疫脾细胞的动物品系相同 (2)  自身不产生免疫球蛋白的重链和轻链 (3)  对氨基碟呤敏感 (4)  与免疫脾细胞融合后产生稳定分泌的Ig杂交细胞 2.   饲养细胞的制备 饲养细胞的作用: (1) 增加细胞浓度,满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的要求 (2)  吞噬清楚死亡的细胞 (3)  分泌生长刺激因子促进杂交瘤细胞的生长 饲养细胞的种类和制备方法 (1)  小鼠腹腔巨噬细胞 (2)  小鼠脾细胞 (3)  成纤维细胞 3.     脾细胞的分离 (1)  拉颈椎处死小鼠 (2)  无菌操作取出脾脏 (3)  清洗、研磨 (4)  收集细胞 (5)  离心洗涤 (6)  细胞计数 4.     细胞融合:骨髓瘤细胞和脾细胞按照1:10或1:5的比例混合并加入促融剂PEG 细胞融合的方法:PEG融合、仙台病毒、电融合 5.    HAT选择性培养        HAT选择性培养的原理:细胞的DNA生物合成右主要途径和补偿途径。当A存在是,能够阻断DNA合成的主要途径,须通过补偿途径合成DNA,这时就需要HGPRT利用H合成DNA,或者TK利用T合成DNA。        由于选用西黄嘌呤鸟嘌呤荷塘转移酶缺陷型(HPRR-)骨髓瘤在细胞或者胸腺嘧啶割肝激酶缺陷型(TK-)细胞作为亲本,该校只能通过群全条件的DNA培养基才可合成,因此杂种细胞通过互补作用获得HGPPT或者TK基因。只有杂种细胞可以活,酶缺乏性细胞完全无法存活,单克隆B细胞一般不能长期生长,就起到了分离杂交细胞的作用。        细胞生长情况:融合3-4天之后,可以看到刑诉骨髓瘤细胞,混元透亮的克隆。融合后第7-9天去培养上清,检测特异性抗体。        筛选后存活的细胞就是脾细胞和骨髓瘤细胞融合细胞。 6.     阳性克隆的筛选 分泌单克隆抗体杂交瘤细胞的检测方法 免疫酶技术:简介ELISA法 免疫荧光技术:间接免疫荧光测定法、流式细胞分析技术(阴性对照:骨髓瘤细胞培养上清,阳性对照:免疫鼠血清) 7.     克隆化培养:阳性细胞的单克隆化 克隆是指由单个细胞繁殖、扩增而形成的性状均一的细胞集落的过程。 常见方法有:有限稀释法和软琼脂克隆技术 有限稀释法:从阳性分泌孔收集杂交瘤细胞。 软琼脂克隆技术:从阳性分泌孔中收集杂交瘤细胞,一适当浓度杂交瘤细胞加入到软琼脂培养基中,形成有一个细胞增殖来的细胞集群。 单克隆抗体的鉴定: (1)  抗体敏感性检测:对腹水和培养基上清进行效价测定 (2)  抗体特异性鉴定:是否与其他抗原右交互反应。 (3) 抗体效价测定 (4)  抗体亚类鉴定:IgG(IgG1、IgG2、IgG3)、IgM (5)  抗体亲和力鉴定 (6)  识别表位分析 8.    单克隆抗体的扩大生产:细胞培养法、小鼠体内诱生法、生物反应器 细胞培养法:杂交瘤细胞、培养瓶或罐中培养、收集上清液、纯化抗体 动物体内诱生法:Balb/c小鼠、腹腔注射液体是啦或降植烷、腹腔内接种杂交瘤细胞、收集腹水 生物反应器:发酵罐培养 单抗培养常见的问题: (1)  污染:培养环境、操作 (2)  融合细胞不生长:PEG、血清、HAT培养基 (3)  抗体分泌不足:支原体污染、细胞突变、培养体系有问题 (4)  杂交瘤细胞难以克隆化:血清质量、细胞活性 第三节  基因工程抗体制备技术 基因工程抗体:通过基因工程的手段,按照个人意愿进行细胞人工改造的技术。 优点主要有:特异性高、质量稳定、成本低廉、工艺简单、异源性滴低、穿透性好、功能丰富。 一、鼠源抗体人源化 鼠源抗体应用中的障碍:免疫原性、半衰期短、抗体功能片段失活。 1.     嵌合抗体:可变区基因克隆、表达载体的构建、嵌合抗体的表达 2.     改型抗体 二、小分子抗体:Fab抗体、Fv抗体和单链抗体、单域抗体、最小识别单位 小分子抗体的优点: (1)可在原核体系中表达,降低生产成本。 (2)因为其分子量小,穿透能力强,易进入病灶部位,有利于对肿瘤等疾病的治疗。 (3)不含Fc片段,不与Fc受体结合,可减少因广泛分布的Fc受体而带来的不利影响。 (4)在体内半衰期短,有利于体内毒性物质的消除 (5)易于进一步基因工程分改造。 三、]基于抗体的应用 1.     CAR-T免疫治疗:        CAR-T免疫疗法:即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法,是一种新型的过继性细胞疗法,即利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞的细胞疗法,并非药物。        CAR-T技术:通过整个嵌合抗原受体的经过基因修饰的T细胞抵抗肿瘤细胞的疗法。嵌合抗原受体可以特异性识别肿瘤相关抗原或者肿瘤特异性抗原,识别结合后将激活及增值信号传递到T细胞内,引起T细胞激活,增殖释放细胞因子,从而杀伤肿瘤细胞。 2. 免疫检查点 3.  免疫毒素 4.  ADC 5.  双特异性抗体 第四节  [endif]抗体库技术 抗体库技术:即用基因克隆技术将全套抗体轻重链可变区基因克隆出来,重组到原核表达载体上,通过原核系统直接表达有功能的抗体分子片段,并筛选出特异性的抗体分子和可变区基因。 一、噬菌体展示技术原理:噬菌体展示技术是将外源蛋白质或者DNA序列查到噬菌体外壳上的适当位置,使外源基因随着外壳蛋白的表达而表达,同时,外源蛋白随着噬菌体的重新组装而展现倒是菌体表面的生物技术。到目前为止,人们已经靠发出单链丝状噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统等。 二、噬菌体抗体制备的基本程序 1.     收集淋巴细胞提取mRNA并转录到cDNA或直接提取斯堡基因组的DNA 2.     扩增DNA的抗体可变区基因 3.     [构建重组噬菌体库 4.     筛选所需特征的重组噬菌体 5.     采用突变或链置换使亲和力成熟 三、噬菌体抗体技术的特点 1.     筛选步骤简单、快速、有效 2.     扩大了筛选流量,一次就可以筛选多于1010个的克隆 3.     抗体基因型与表现性联系密切,基因稳定且容易改造 4.    模拟天然免疫系统亲和力成熟过程 5.     无需人工接种 6.     可替代动物多克隆抗体 7.     构建康体苦时。轻重链可变区基因在体外随机组合,可产生体内部存在的轻重链组合,得到新的特异性抗体。 8.     可以在预案和系统中表达,大规模生产方便,且成本低。 四、抗体库技术的应用 1.     制备全人源抗体 2.     改良基因工程抗体

研究方向:教学方面:目前为止招收生物化学与分子生物学专业 免疫化学与分子免疫学方向博士和硕士研究生;免疫学专业 抗体技术及应用方向硕士研究生。为本科生和研究生开设了细胞生物学,动物细胞工程和抗体工程等课程。主持动物细胞工程校级精品课程建设,指导郁颖等同学的“挑战杯”作品获广东省第九届“挑战杯”大学生科技作品竞赛三等奖。科研方面: 主持了国家“863”项目、国家自然科学基金、教育部科学技术研究重点项目,广东省自然科学基金和广州市科技攻关重点项目等科研课题。申报国家发明专利6项,在国内外学术期刊发表研究论文50 余篇。主要研究方向围绕基因工程抗体与抗体药物开发,肿瘤多肽疫苗,肿瘤干细胞等开展研究。开展了抗体库的构建、人源抗体的筛选;抗体亲和力成熟和抗体的人源化改造;抗体的高效表达和纯化技术平台建立等。开展了bFGF单克隆抗体的抑制肿瘤作用研究,进一步开展抗体药物研究。开展了抑制肿瘤血管新生的多肽疫苗的研究等,建立了抑制肿瘤血管生长的细胞模型和小鼠动物模型。探讨了VEGF/bFGF多肽疫苗在肿瘤血管新生和抑制肿瘤生长转移的作用等。主要论文:bFGF 与VEGF 抗原表位筛选及复合肽的表达鉴定.2010,26(8):688-693bFGF单克隆抗体抑制小鼠Lewis肺癌转移及血管新生. 《中国癌症杂志》2010, 20(6): 401-405嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响. 中国生物工程杂志2010, 30 (3) : 9-14 血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究. 中国免疫学杂志, 2010, 26(5):, 407-412bFGF 单抗与顺铂体外联合抑制黑色素瘤B16 细胞增殖效应的研究. 中华肿瘤防治杂志2010, 17 (1): 1-4 VEGF189基因合成、原核表达及鉴定. 免疫学杂志, 2009, 25,(4):469-472重组VEGF2A189 发酵、纯化及鉴定. 暨南大学学报(自然科学版).2009, 30(5):560-565苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红竞争ELISA检测方法的初步建立, 食品科学, ,2008年 8月,29(8):523-525人bFGF 单克隆抗体的制备及MabF7 对黑色素瘤B16 的体外抗瘤效应。中华肿瘤防治杂志,2008,15(1):19-22bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达,免疫学杂志,2007,23(6): 598-601重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达. 细胞与分子免疫学杂志,2007,23(12):1150-1153(邓宁通讯作者)bFGF反义硫代核苷酸增强人喉癌Hep2细胞的化疗敏感性。中国肿瘤生物治疗杂志,2007, 14(5):461-465VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析,中华微生物学和免疫学杂志,2007,27(3):263人噬菌体抗体库的构建及人源性抗bFGF抗体的筛选,免疫学杂志,2006,22(4):451-454 (邓宁通讯作者)bFGF mRNA、bFGF及FGFR1与神经胶质细胞恶性行为的相关性 ,中国免疫学杂志,2006,22(5):440-444自身免疫性患者血清中抗bFGF自身抗体的检测,细胞与分子免疫学杂志,2005, 21(5):625-627人工合成VEGF表位模拟7肽的生物学功能研究, 细胞与分子免疫学杂志,2005,21(1):37-38

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纯电动汽车论文的参考文献

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07届汽车运用技术专业毕业设计(论文)计划与任务书 发表日期:2007年1月4日 【编辑录入:admin】 汽车学院07届汽车运用技术专业毕业设计(论文)计划与任务书 为了提高学生综合运用所学的基础知识和专业知识的能力,培养理论与实践相结合和解决实际问题的能力。现对毕业设计(论文)和答辩提出以下要求: 一、 毕业设计(论文)及答辩的时间 班级 04汽车运用(1) 04汽车运用(2) 04汽车运用(3) 05汽车运用(3) 时间 07年3月8日~4月13日 07年3月8日~4月13日 07年3月8日~4月13日 07年3月19日~4月27日 选题时间 3月8日~15日 3月8日~15日 3月8日~15日 3月19日~26日 提交提纲时间 3月16日~18日 3月16日~18日 3月16日~18日 3月27日~30日 提交初稿时间 3月19日~25日 3月19日~25日 3月19日~25日 3月31日~4月6日 提交修改稿时间 3月26日~30日 3月26日~30日 3月26日~30日 4月7日~11日 提交最后稿时间 4月4日 4月4日 4月4日 4月18日 答辩时间 4月9日 (学号前一半) 4月10日 (学号后一半) 4月11日 (学号前一半) 4月12日 (学号后一半) 07年4月13日 07年4月23日 二、毕业设计(论文)指导与任务书 (一)选题 汽车技术性论文、故障诊断、维修工艺说明书、汽车维修经验及其他形式论文。确定题目时要与指导教师商讨,并征得指导教师的认同。 1.汽车技术性论文(首选) 以汽车的新工艺、新设备、新知识、新技能方面为主。论文要突出应用技术,注重理论对实践的指导,且具有一定的实用价值。 2.汽车故障诊断论文 结合实习过程中遇到的实际故障案例,撰写汽车故障检测、诊断和排除方面的论文。 3.维修工艺说明书 为了丰富学院汽车运用专业教学内容,让教师学习各大汽车厂的特色,学生可撰写《维修工艺说明书》,但只能选择新工艺、新技术方面的内容,并且要求尽可能使用图形、数据来说明问题,力求工艺内容完整。文章若评优,论述和说明的文字内容一定要上升到一定理论水平。 4.维修经验和其他形式的论文 学生可撰写汽车维修经验方面的总结,但要提升到一定的理论高度。对于其他形式的论文,除格式上要与汽车技术论文要求相同外,还要求内容一定要与汽车有关联,不能写与汽车毫不沾边的论文,具体要求请与指导教师联系协商。 (二)论文格式 论文要包括标题、摘要、关键词、正文、结束语、致谢、参考文献等。 1.标题:标题要准确地反映论文的中心内容。 2.摘要:又称提要,比较简短,它是全文的高度“浓缩”,内容包括本论文的目的、意义、对象、方法、结论和应用范围等。一般在100字左右。 3.关键词:又称主题词或标题词,它是从论文中选出最能代表论文中心内容特征的词或词组,是论文最高度的概括,一般选出3~5个关键词。 4.正文:正文是论文的主体部分。正文就是提出问题、分析问题和解决问题,是运用素材,论证观点的部分。 5.结束语:结束语一般包括结论和建议部分。结论是全文的总结,是论文的精髓,写作要十分严谨,解决了什么问题,得出了什么结果,存在什么问题,应是非分明地讲清楚。 (三)规范要求 1.文章要求3500字左右; 2.使用A4纸打印出来,装订好后交指导老师; 3.自己设计封面(内容应包括学院名称、系别、专业、论文题目、姓名、班别、学号和指导老师)。 (四)成绩评定要求 1、毕业论文选题应符合要求,并与指导老师商讨后选定; 2.毕业论文在撰写过程中,必须按规定时间向指导老师提交提纲、初稿、修改稿和最后定稿。否则不准参加答辩。 3.论文成绩的评定包含平时成绩和最后论文质量成绩。 (五)其他 1、无实习单位的学生在毕业设计期间一定要返校,由汽车学院实验实训部安排实习并进行论文写作; 2、答辩时间,一定要按时返回学校参加毕业答辩,否则不给成绩。 记得采纳啊

汽车毕业论文参考文献

紧张而又充实的大学生活即将结束,毕业生都要通过最后的毕业论文,毕业论文是一种有计划的检验大学学习成果的形式,那么应当如何写毕业论文呢?下面是我整理的汽车毕业论文参考文献,仅供参考,大家一起来看看吧。

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论文格式说明

(1)题目(仿宋_gb2312,三号字)力求简明、醒目,反映出文章的主题。中文文题一般以20个汉字以内为宜,不用非公知公认的缩写或符号,尽量避免用英文缩写。

(2)作者(仿宋_gb2312,小四)作者姓名居题目下方。

(3)指导老师(仿宋_gb2312,小四)

(4)学校专业、学号(仿宋_gb2312,五号)

(5)摘要:200—300字左右(摘要两字字体为仿宋_gb2312,五号,加粗。内容字体为仿宋_gb2312,五号)摘要的内容应客观真实,采用第三人称撰写,不用“本文”、“作者”等主语,应反映文章的主要观点,重点表述研究内容及结论,交待相关的研究条件、方法等,必须重点突出、文字简练。

摘要中要突出描述作者所做的工作,不要或尽可能少地出现“介绍”、“总结”之类的词,用“本文研究了……”“本文提出了……”

(6)关键字:3—5个(关键字三字字体为仿宋_gb2312,五号,加粗。内容字体为仿宋_gb2312,五号)要符合学科分类及专业术语的通用性,并注意与国际惯例一致。

(7)正文(正文字体全部为仿宋_gb2312,小四。但大标题或小标题均加粗)

正文中的序号及标题层次 :文中的各种序号,全部用阿拉伯数字按顺序左起顶格书写。标题层次不宜过多,有标题才有序号,标题层次按第一层1,第二层,第三层,第四层的顺序逐级标明,不同层次的数字之间加下圆点相分隔,最后一位数字后面不加标点,写法如下:

1 △△△△(章的标题,顶格,占一行)

△△△△(条的标题,顶格,占一行)

△△△△(顶格,接正文)

△△△△(顶格,接正文)

(正文内容要求:1、现状 2、存在问题 3、对策建议)

(8)参考文献(参考文献四字字体为仿宋_gb2312,五号,加粗。内容字体为仿宋_gb2312,五号)注意根据自己的大纲来进行资料的搜集和取舍,即根据自己的想法来控制和组织资料,而不是被资料控制。注意所搜集材料的正确性及用词的规范性。

按照下列顺序排列文章

论文总标题:字体仿宋,字号三号,20字以内,汉字

作者:总标题正下方,字体仿宋,字号小四

指导老师:作者正下方,字体仿宋,字号小四

学校、专业、学号:居中,字体仿宋,字号五号

摘要(“摘要”这两个字仿宋,五号,加粗,顶格):200-300字,仿宋,五号字

关键字(“关键字”这三个字仿宋,五号,加粗,顶格):3-5个词,仿宋,五号字

正文:仿宋,小四(如果包含小标题,小标题加粗)

毕业论文格式

一、 论文的格式要求

1.论文用A4纸打印;

2.论文标题居中,小二号黑体(加粗) ,一般中文标题在二十字以内;

4.副标题四号,宋体,不加粗,居中

5.论文内容摘要、关键词、参考文献、正文均统一用四号,宋体(不加粗);大段落标题加粗;

6.页码统一打在右下角,格式为“第×页 共×页” ;

7.全文行间距为1倍行距

8.序号编排如下:

一、(前空二格)――――――――――――此标题栏请加粗

(一) (前空二格)

1.(前空二格)

(1) (前空二格)

二、 内容摘要、关键词

内容摘要是对论文内容准确概括而不加注释或者评论的简短陈述,应尽量反映论文的主要信息。内容摘要篇幅以150字左右为宜。关键词是反映论文主题内容的名词,一般选用3-4个,每个关键词之间用分号隔开。关键词排在摘要下方。“内容摘要”和“关键词”本身要求用[关键词][内容摘要](综括号、四号、宋体、加粗)。

三、正文部分

正文是论文的核心,要实事求是,准确无误,层次分明,合乎逻辑,简练可读。字数不少于3000字。

文字要求规范;所有文字字面清晰,不得涂改。

数字用法 :公历世纪、年代、年、月、日、时刻和各种计数与计量,均用阿拉伯数字。年份不能简写,如2015年不能写成15年。

四、参考文献

参考文献其他部分统一使用四号宋体不加粗。“参考文献”本身要求用参考文献:(四号、宋体,加粗)。

五、致谢

致谢

两字本身用四号,宋体,加粗,居中。内容为四号宋体,不加粗。

汽车论文参考文献

在日常学习和工作中,许多人都有过写论文的经历,对论文都不陌生吧,论文是学术界进行成果交流的工具。写起论文来就毫无头绪?以下是我整理的汽车论文参考文献,欢迎大家分享。

1、汽车AMT控制系统及离合器模糊控制方法的研究 重庆交通学院 2004 中国优秀硕士学位论文全文数据库

2、中国汽车零部件行业发展模式研究 吉林大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

3、汽车行业一体化(质量、环境、职业健康安全)管理体系认证的研究 吉林大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

4、汽车驾驶员前方视野测量系统软件开发 吉林大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

5、合肥汽车客运总公司发展战略研究 合肥工业大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

6、哈尔滨成功汽车维修有限公司发展战略案例 哈尔滨工程大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

7、汽车齿轮工艺的研究与应用 哈尔滨工程大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

8、我国汽车企业品牌竞争力研究 湖南大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

9、汽车造型中的张力和表现性研究 湖南大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

10、湖南汽车零部件产业发展研究 湖南大学 2007 中国优秀硕士学位论文全文数据库

11、丁冰,汽车安全气囊的控制,《现代汽车技术》, , (1995), 109--120;

12、朱军编著,《电子控制发动机电路波型分析》,机械工业出版社,2003年1月第一版,P149

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数字媒体艺术论文答辩自我介绍

这个简单我也要考这个明天去 现传授你点近期学习的经验 1、报上名姓名 2、报上年龄 3、就读的学校 4、自己的爱好 特长 【一定要有特点奥】 5、自己的理想 【也就是说说点好话 说说数字传媒好】 6、最后说 我是****号考生***请您记住我 7、最重要的是不要紧张 有什么说什么 不会说就别说了 千万不要吓说

艺考生数字媒体艺术面试自我介绍需要按实说,说出特点,说出优点。

自我介绍在考试中向考官传达出的第一印象,它不止包括说话内容,更包括讲话时的仪态、举止、精神气场。在进行自我介绍时,你的表情、神态、衣着、姿态、声音??都在综合传达着信息,而你要做到的是,传达准确、丰富、易接收、人设统一的信息量。

什么样的考生更容易在考场中脱颖而出呢?简单的说就是观感舒适、语言得体、逻辑完整、点睛之笔。

不需要颜值逆天,只要仪容整洁、姿态端正、举止大方、精神饱满,就能带给别人舒适的观感。在面试时头发衣着都尽量做到整洁,不要穿过于花哨或另类的服装,带有大logo或装饰繁复的衣物会干扰面试官的注意力,设计简约、颜色清爽为佳。

试环节,只要保持轻松,态度诚实,语言流利,自我介绍反而是最简单的,无非就是让考官在短时间内了解你,包括你的姓名,家乡,兴趣爱好,对编导专业的看法等等,要表达出对影视行业的浓厚兴趣;

一定要诚实,因为考官在面试你的时候他手上已经有你的详细资料了,甚至你上一场考试的试卷的照片,如果你耍个小聪明,撒个谎,很容易被拆穿,无论你之前的成绩多好,你都可以乖乖回家了。

面试只是前奏,一笔带过即可,不必把大量备考时间放在这上面,回答考官提问才是主题曲,通过回答问题,考官能发现很多信息,简单说就是看看你是不是干编导这一行的料。

面试官好:我叫xxx,今年在某某大学数字媒体艺术系刚刚毕业。今年XⅩ岁,我查阅了许多公司的资料,觉得我们公司最适合我。原因是我们公司离我家不是特别远,不用给我包住。我们公司在业内以及网络上评分,员工反馈都非常的好,就是我向往的公司。

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