兰花组培培养技术毕业论文
收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. 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植物组织培养前景园艺植物组培苗工厂化生产能快速将优良品种转化为现实生产力，在遗传育种、种质资源保护、次生代谢物利用上也将有很大的发展潜力。只要选好优良品种，合理布局、节约成本，组培产业将会有蓬勃的发展和广阔的前景。2．1 花卉种苗产业化生产 花卉业是21世纪的希望产业，是社会经济发达与文明程度的重要标志，我国目前花卉需求量以每年35％～40％的速度递增。在花卉生产方面，种苗质量在栽培生产中的重要性日益明显，因此花卉种苗工厂化生产是花卉种苗生产的主要途径。2．2蔬菜种苗生产及脱毒马铃薯、食用百合、大蒜等是人们餐桌上的主要蔬菜，消费量和种植面积均很大，也是我国出口创汇的主要品种。这些品种随种植年限的增加，易受病毒感染，产量、品质逐年下降，运用组培脱毒技术可迅速恢复品种种性，提高生产力。2．3瓜果组培苗产业化草莓果实中所含的鞣花酸具有抗癌效果，且草莓易栽培、产量高、经济效益好，因此在江浙一带发展迅速。但草莓易感染各种病毒病，感病的果实畸形、品质差，一般减产30%～80%。对草莓进行热处理结合分生组织培养脱毒，去病毒苗可增产1000kg／667m2，品质有较大提高。甜瓜以肉质细脆、香气浓郁、味道甘甜而深受人们喜爱，效益较高，但长期种植会使品质退化和混杂。可从大田健壮植株上取嫩梢，作为外植体组培生产出优良种苗，其生产性状优于种子苗，虽具有缓苗时间较长，苗早期生长势弱的特点，但缓苗以后的种子苗生长更日壬，后期能超过种子苗，且苗期较短，开花结果期提前，整齐度大大提高，性状一致，瓜的成品率明显提高，完全保持所采植株的优良性状，无退化和变异现象发生。欧美葡萄是当前最热门的葡萄品种，果粒大、甜度高、价格昂贵、经济效益高，如运用组织培养快速繁殖技术大量生产将具有良好的发展前景。植物组织培养在园艺植物上的应用：采用植物组织培养中的脱毒技术使园艺植物产量大幅度提高，且品质得到改善。很多作物因受病毒感染，产量和质量下降，有些创汇作物失去了国际贸易的竞争优势，如大蒜、百合、薄荷等。利用脱毒技术，可大幅度提高产量。大蒜的蒜头直径由4．7cm增加到7．2cm，增长2．5cm，蒜头重由29．2g／个提高到75．8g／个，平均增重近46g／个。草莓经脱毒后增产20％～30％，品质提高，脱毒苗生长快、长势旺、茎叶粗壮、抗病耐高温、抗寒性能强、寿命延长。美国在试管内生产脱毒马铃薯种子，1b种子可代替1t种薯，该项成果每年获利2亿美元。我国近两年生产和推广脱毒薯，解决了马铃薯退化，无毒种薯已在主产区普及，推广种植面积达66．67万hm2，增产幅度在30％～40％以上，每年增效2．5亿元。脱毒马铃薯已在日本、荷兰、越南等国大面积应用。日本脱毒草莓种植面积达11．33万hm2，占生产总面积的80％以上，产量提高l 5％～30％，可增加产值11亿日元。 植物组织培养及产业化生产发展迅速。由于试管苗繁殖周期短、繁殖系数高且不受季节限制，便于工厂化生产。20世纪80年代初在全世界范围内，利用植物组织和细胞培养技术，形成了一个新兴的产业，如美国的兰花试管苗生产及荷兰的花卉试管苗生产。 单倍体育种通过花药或花粉的离体培养诱导产生单倍体植株，然后对它们进行染色体加倍，可得到纯系。在作物育种上应用这一技术可以加快纯合，降低误选，缩短育种年限。花药培养自20世纪60年代获得植株以来，发展很快，取得很大成绩。首先获得小麦、玉米、橡胶、柑桔等10多种作物花培植株，并已培育出小麦、水稻、烟草等花培新品种50多个，例如水稻品种新秀、单丰1号、花育1号等及中科院作物所李梅芳等培育的中花号、北京市农科院培育的京花号、吉林农科院培育的吉粳号、辽宁省盐碱地所培育的花粳45等。小麦品种京花1号、花培l号、京花3号等均推广应用于生产，其中小麦品种京花3号推广面积达6万hm2。 选育玉米自交系通常需要连续自交多代，花费大量的人力物力，用花药培养单倍体植株，再经染色体加倍即可得到纯合的自交系。广西农校1983年用该技术育成了自交系花83—2。我国已获得100多个玉米花培纯系，并已配制出优良组合应用于生产。 利用单倍体植株作为诱变材料，无论诱变突变是显性还是隐性，在处理当代即可看到，优良变异一经选出，经染色体加倍就可得到纯系，可以提高诱变育种的效果。 目前，花药培养技术已成为加快育种进程的有效手段，人们正在对该技术进行更深入地研究。魏小平等试验表明，在诱导愈伤组织阶段加入CPPU可提早小麦花药出愈时间，对于难培养的材料有显著的诱导作用，所诱导的愈伤组织易分化绿苗。辽宁省盐碱地利用研究所试验表明，水稻 MS分化培养基中加入适量MET可提高绿苗分化率及幼苗素质。王培等研究发现，染色体的加倍时期对冬小麦花粉植株的结实率有影响。 远缘杂交育种 远缘杂交的双亲由于遗传特性有显著差异，常造成杂交不亲和或杂种胚发育不全、中途天亡等情况。通过子房和胚的离体培养与试管离体受精可以克服远缘杂交不亲和；如果在杂种胚发育的适当时期取出胚进行离体培养，可能获得杂种幼苗，得到远缘杂交后代。目前已有100多种植物培养成功，并应用于作物育种或生产。例如日本育成大白菜和甘蓝杂种一白蓝，该品种具有大白菜和甘蓝双亲优点。中国农科院作物所用类似的方法得到了小麦与玉米的杂交植株。中国农科院蔬菜花卉研究所方智远等通过幼胚培养，已获得萝卜与甘蓝的杂交1代和回交1、2、3、4代材料。北京市农林科学院通过胚胎培养技术培育出早3号早熟桃，比亲本早上市半个月左右。组织培养用于远缘杂交来创造新的物种资源在小麦、蔬菜上开展的较好，在水稻上的研究尚少，应加强。 无性系变异的筛选体系胞在离体条件下及离体培养前会发生各种变异，筛选优良的无性系变异可育成新品种。如果植株的某一部分组织细胞中发生了变异，将该部分分离下来进行离体培养，可获得再生植株，进而培育成品种。在培养基中施加某种选择压力，从中筛选无性系变异培养新品种已在许多作物上获得成功，该技术特别适于抗性育种。河北师范大学生物系利用小麦成熟胚诱导愈伤组织，然后转入含0．5％氯化钠培养基上进行耐盐筛选，继而转入含盐分化培养基上获得小麦耐盐突变体RS8901—17，经鉴定连续3 a耐盐力均为一级，且矮秆丰产；山东农科院原子能所利用γ射线照射小麦幼胚离体培养出愈伤组织，选育出体细胞无性系变异新品种核生2号，表现高产优质。筛选无性系变异在个体水平上的诱变与常规变异相比，具有变异频率高、稳定快并可在室内有控制地进行，节省人力物力和财力，提高选择效率等优点。 组织培养应用于脱毒苗的培养与快速繁殖 利用植物生长点进行组织培养成幼苗，从而获得无病毒植株，这在国外20世纪50年代已经育成并投人生产，我国70年代开始这方面的试验。1990年马铃薯无病毒种苗栽培面积已占全国总面积的1／10，脱毒苗一般增产50％~100％，表现为茎秆粗壮、叶色浓绿、光合效率高、抗病性强、产量高。目前，为了提高脱毒效果，降低成本，人们又在探索更有效的脱毒技术和种苗繁殖技术。 经济作物及观赏植物的快速繁殖日趋火热。许多名贵花卉由于种子败育，扦插成活率低而难以繁殖，应用组织培养可以快速繁殖，批量生产，提高经济效益，也挽救了优良物种。美国、新加坡、泰国建立了几十家兰花快繁工厂，日本草莓试管苗种植面积超过11万hm2，据1990年统计，我国快速繁殖的植物已达443种，已有100多个机构采用快速繁殖技术进行工厂化大规模商品生产，其中月季、菊花、非洲紫罗兰、蝴蝶兰、马蹄莲、朱顶红等已用于生产。 组织培养应用于种质资源的保存和基因库的建立 生命物质的保存，已引起许多科研工作者的兴趣，其中包括原核生物、植物及动物材料的保存，种质保存的目的是为了确保有用的种质能在任何时候都具有生命力。组织培养能安全地保存植物的细胞、愈伤组织或分生组织，且在储藏几年后，仍能稳定地产生再生过程。通过无性系繁殖保存作物已成为迫切要求，尤其对于热带作物。另外，由于自然和人为的破坏，许多具有或可能具有育种价值的能成为基因库的品系在消失，作物栽培品种、亲本植物品系以及突变种也通常需要保存。组织培养对于植物生长和基因型保存研究要比大田繁殖优越，节省土地、人工、能源。组织培养材料体积小，对于冷冻后解冻还能存活的细胞来说，利于在低温或超低温中长期保存。种质资源的保存和基因库的建立在育种工作中是十分重要的。
A、方法 分开的兰丛，不要拆得太零星，每丛至少有3—5苗，最好是一年生植株、二年生植株和三年生植株保留在 品种8同一丛中。 (1)垫盆。盆底用—块瓦片盖住排水孔，再用砖块，瓦片或贝壳逐步填充，其中大隙缝填充以泥粒或豆石，一般约为盆内高度的1／2—1／3。上余的净高约10—15厘米，留作培养土层。其具体高度应根据兰花的种类及兰根的长短和盆的高矮而定。铺垫物不要填得太密太实，应保留一点孔隙。实践证明，有的新根能在铺垫层的孔隙中生长良好。 (2)栽植。在铺垫层上，先填上2—3厘米的培养土，用手稍压实，即可将兰花正立摆布其上，根据植株与花盆大小，可以几个单株、2丛、3丛或更多丛种在一个盆里。3丛宜栽成鼎足之势。4丛可栽成四方形，五丛宜列成梅花形。兰根要自然舒展，叶片要四方披拂。要缓缓地将兰根放入盆内，使兰根自然舒展，尽量不与盆内壁碰擦。 兰株入盆后，就逐步固定兰株姿势。—盆栽一丛的，应使老假鳞茎偏居一侧，使新芽有发展的余地。 一盆栽数丛的，每丛的老假鳞茎应相对地集于盆之中间，使新根新芽向外发展各有足够的空间。 (3)填土。栽植时，一手扶叶，一手添加营养土，执住兰株基部稍往上提，以舒展根系，同时摇动兰盆。让培养土深入根际；继续添土，并摇动兰盆，调整兰株的位置和高度。用手沿盆边按压，但切勿过重而伤根，继续添土并挤压，直至盆面土壤高出盆口2—3厘米，略呈馒头形。培养土应将全都兰根盖住，掩至假鳞茎基部， 填土的深浅，传统认为：春兰宜浅，惠兰宜深，但一般以不埋及假鳞茎上的叶基为度。新发兰花在山野里 品种9生长时，植株上留下了土表上下的明显标志，可以此标志为准。花盆的大小也要和植株的大小、多少相称，既不要盆大而株小又少，也不宜盆小而株大又多。一般植株的数量，以预计2—3年后刚好长满盆为原则。植株大小与盆的高度相称。既利于生长，又符合观赏要求。 (4)铺面。栽植完毕后，可在盆土表面铺上一层小石粒或青苔，最好是林下优质苔藓，既美观、又可调节水分，还可保护叶面不被泥水污染，新芽也不致感染泥土中病菌而烂心；此外，还可减缓雨水对盆土的冲刷，保持盆土疏松。 (5)浇水。栽植完成后，即浇第一遍水，必须让盆土湿透，水滴宜小，冲力忌大。若置于水盆中浸水、切不可浸泡太久。盆土一经浸湿，立即将兰盆搬出，然后移置于荫蔽之处养护。B、栽培和病虫害 1。试管栽培： 随着兰花组织培养技术和无菌播种技术的不断发展，兰花在试管内开花的现象正日益受到重视。这一现象之所以能吸引育种学家的目光，主要原因是原来需要常规栽培许多年才能开花的人工杂交新品种，现在在试管里，通过1~2个培养周期就能人为地促使其开花，这样就可以根据开花的情况有目的地选育具有优良性状的个体，淘汰相对较差的个体，从而使整个育种的周期缩短，并大大减轻大量栽培未见花品种的工作量，使育种工作更富有针对性。 由于我们长期从事的是兰属植物中几种常规栽培的地生兰种的开发和研究，因此下面提及的兰花，均是指这几个兰种而言，包括春兰、建兰、春剑、莲瓣、蕙兰、寒兰等。 兰花在试管内开花的方式，根据目前的观察结果，大概可以分为三种类型。第一类是由兰苗的腋芽发育成花芽，这种方式跟常规栽培中兰花的开花方式是一样的，只不过常规栽培是一丛苗起花，试管内是单苗起花而已，这种情况在建兰中比较普遍，春兰春剑等品种中比较少见。第二类是兰苗的顶芽发育成花芽，类似通常所说的草中箭（ 草心箭），花由兰苗最中心长出，这种情况在各个兰种中都有出现，尤其是在春兰中常见。第三类是由原球茎的顶端直接分化出花芽，这类方式完全由培养基内的激素水平控制，起花快而整齐，分化频率高，是目前主要的诱导起花方式。 兰花在试管内开出的花朵，基本的品种特征是不会改变的，例如素心品种开素花,绝不会开彩花。凡是有香味的品种,试管内的花也是有香味的,并且香味浓郁,不亚于盆栽兰花的香味,这一点可能出乎很多人的意料。由于试管内的温度等环境条件的原因,花期通常只有几天时间,不如盆栽兰花开花持久，在低温条件下，花期则可以大大延长。兰花在试管内开出畸形花的比例是比较高的，有些品种可以达到10~20%。一般来讲，这些畸形花通常都是生理性的原因和外部培养条件的原因造成的，例如激素水平、无机盐等理化因素，而不是遗传上的相应改变，因此这些畸形花的出现，在遗传和育种上毫无意义。我们曾追踪观察过很多的奇花品系，希望能从中选出新的优良品种，结果绝大多数以后又开出了正常花，真正能稳定的是极少的。 一个对兰花培育者十分有用的现象是，试管内开出的花，多数情况下，合蕊柱都能正常发育，具有正常的授粉能力和结实能力，我们曾镜检过小孢子的发育过程，发现其减数分裂过程和花粉粒的形成过程基本是正常的。尤其是以腋芽的方式开出的花，授粉后结出的果实很容易正常发育至种子成熟，并且这些在试管内结出的种子，有一定的发芽能力，尽管发芽率比盆栽兰花的种子的发芽率低，但对育种者来说，已经足够了。 随着技术水平的不断进步，人们控制兰花在试管内开花的能力越来越强，这无疑会对兰花的杂交育种工作产生积极而深远的影响。由于兰花的主要欣赏点在花艺上，一个未知的品种，在开花前也基本无法从叶片上判断其优劣，所以育种工作者不仅要选择合适的优良亲本做杂交并且培育出小苗，还不得不把这些小苗，不论好坏，一古脑地种进温室，苦等数年至开花，才能从中筛选优秀单株。这一过程的工作量是很大的。即使获得了优秀的单株，很不幸的是每一个单株的数量也是非常少的，通常只有几苗，根本满足不了市场需求，还必须以这一优秀单株为外植体，再从头做一次组培。从开始作杂交工作，到最后有商品苗供应市场，这一过程要经历两次组培周期，两次从瓶苗到开花的栽培周期，一般要十多年的时间。而试管内开花技术的完善，使我们不必经过栽培过程，就可以在试管内筛选优良株系，并且一旦选出，可以直接进行快繁，不必再经过原球茎的诱导过程，使整个育种周期缩短将近一倍的时间。 兰花在试管内开花带来的另一便利之处是使兰花的瓶内杂交成为可能，这是一个全新的应用研究领域。有些育种工作，需要进行反复的杂交，回交和自交，才能实现育种目的，选育出优良的新品种。例如素心品种和梅瓣品种的杂交，子一代通常是梅瓣但肯定不是素心，这就需要子一代和素心亲本回交一次，或者子一代自交一次，再从子二代中选择素心梅瓣。采用常规办法，这一过程肯定要用十几年时间，现在有了促使兰花试管内开花的方法，我们就可以在试管内让子一代开花，并且在试管内进行自交授粉或子一代植株之间相互授粉，并培养出种子。这些种子无需消毒直接播种于培养基上，获得子二代，再诱导出花，即可从子二代中间选择想要的品种了。这一过程比常规方法，至少可以节省两个从瓶苗到开花的栽培周期。 另外，由于试管内开花不受季节限制，可以随时诱导，这就为不同季节开花的兰花品种或者是花期不遇的兰花品种之间的杂交提供了很大的便利。换句话来说，试管里开花的兰花，为杂交育种工作提供了稳定的花粉源。依据这一思路，我们在很大程度上摆脱了开花季节的限制和种源数量的限制（有些数量很少的品种，要见一次花可能要等很多年的时间，并且开花时不一定有非常合适的其它亲本材料同时开花），已经成功地实现了不同季节开花的兰花品种之间的杂交。 目前而言，兰花这一领域的研究工作，尚处在刚刚起步的阶段，还有很多不尽人意之处，并不是每个品种都能诱导出花，也不是每个品种都能达到需要的成花率，更没有一个现成的程序能让所有的品种开出花来，每一个品种都需要进行大量的试验和摸索。但这些基本都是技术性的问题，相信随着技术的进步，随着更多的有识之士加入到这一领域的研究和开发中来，这些问题会逐步得到解决。 2。繁殖方法： 兰花常用分株、播种及组织培养繁殖。 a．分株：在春秋两季均可进行，一般每隔三年分株一次。凡植株生长健壮，假球茎密集的都可分株，分株后每丛至少要保存5个连结在一起的假球茎。分株前要减少灌水，使盆土较于。分株后上盆时，先以碎瓦片覆在盆底孔上，再铺上粗石子，占盆深度1／5至1／4，再放粗粒土及少量细土，然后用富含腐殖质的沙质壤土栽植。栽植深度以将假球茎刚刚埋入土中力度，盆边缘留2厘米沿口，上铺翠云草或细石子，最后浇透水，置阴处10～15天，保持土壤潮湿，逐渐减少浇水，进行正常养护。 b．播种繁殖：兰花种子极细，种子内仅有一个发育不完全的胚，发芽力很低，加之种皮不易吸收水分，用常规方法播种不能萌发，故需要用兰菌或人工培养基来供给养分，才能萌发。播种最好选用尚未开裂的果实，表面用75％的酒精灭菌后，取出种子，用10％次氯酸钠浸泡5～10分钟，取出再用无菌水冲洗3次即可播于盛有培养基的培养瓶内，然后置暗培养室中，温度保持25C左右，萌动后再移至光下即能形成原球茎。从播种到移植，需时半年到一年。组织培养已获成功，有条件的地方可用此法繁殖。 3。繁殖技术 a. 场地选择: 要求四周空旷，通风良好，并靠近水面，空气湿润，无煤烟污染。场地的西南面，可种常绿阔叶树，郁闭度应在0．7左右，这样可减少午后阳光照射，调节湿度与温度。 b．浇水: 以雨水或泉水为宜，不宜用含盐碱的水，如用自来水，应将水搁置数天后使用。浇水要看气温情况而定，春季浇水量宜少，夏季宜多；梅雨季节正值兰花抽生叶芽，盆土宜稍干；秋后天气转凉，浇水量酌减，保持湿润即可。冬季在室内宜干，减少浇水次数，且宜于中午时浇。兰花可淋小雨，但连续下雨或暴雨则易烂心、烂叶，故须注意防雨。 蕙兰c．施肥: 栽兰宜用饼肥，以草木灰4份、豆饼10份、骨粉10份混合拌匀，放于缸内，分几次加水，使豆饼浸涨为止，后加盖密封，经一年腐熟，再制成干粒。使用时放于盆面即可。如用全粪，也应经一年腐熟，掺水冲淡滤渣使用。一般从5月开始施肥，至立秋停肥，掌握薄肥多施。施肥应在傍晚进行，第二天清晨再浇1次清水。 d．遮阳及防寒: 除早春及冬季外，都要放在露天棚下。荫棚要求通风良好，兰花在3～4月间刚出房时，可以多晒太阳，以后蔽荫时间渐增。冬季兰花须搬入室内防寒，室温保持1C～2C即可。另外，兰花在春季出房后，秋季进房前，也要注意防霜。 4.病虫害防治 a. 通常使用的方法： 兰花的主要病虫害有： （1）白绢病：多发生于梅雨季节。应注意通风透光，盆土排水良好予以预防，发病后可去掉带菌盆土，撒上五氯硝基苯粉剂或石灰即可。 （2）炭疽病：终年都有，高温多雨季节更为猖极。防治方法除改善环境条件外，发病期可先用50％甲基托布津可湿性粉剂800～1500倍液喷治，7～10天互次，然后再辅以l％等量式波尔多液，每半月1次。 （3）蚧壳虫：在高温多湿、空气流动不畅的情况下，繁殖最快。用常规法防治。 综上所述，要养好兰花，必须掌握其自然生长环境条件，采取合理措施，加强养护管理。据《养兰诀》载：“春不出，夏不日，秋不于，冬不湿”，这便是我国养兰经验之概括。 b. 无公害防治病虫害方法： 兰花的病虫害，近代多使用化学农药防治。农药使用过量，兰花易遭药害。长期单一使用化学农药或使用次数频繁，会使害虫病菌产生抗药性而起不到防治效果。喷洒农药时还会污染环境，严重者会使人畜中毒。无公害防治兰花病虫害自古有之，近代也屡见不鲜。兰花病虫害无公害防治具有行之有效、成本低廉、取材容易、方法简便、不会污染、无副作用等诸多优点，值得提倡。下面介绍一些民间流传的无公害防治兰花病虫害的小验方。“小”验方，往往也许能够解换“大”问题，兰友们不妨一试。 一、茶麸 茶麸，也称茶枯、茶籽饼，系茶籽榨油后剩下的渣料，农民常用来洗涤衣服。茶麸中含有皂素和糖苷，其水浸出液里碱性，对害虫有很好的胃毒和触杀作用。防治方法：1．将捣碎成粉状的茶麸、沸水按1：5的比例浸泡一昼夜，用其淋浇兰盆，同时淋浇兰盆放置的场所及其他兰盆，对蜗牛有较好的防治作用。2．用茶麸水喷洒兰株，对蚜虫和红蜘蛛的防治效果很好，可达90％以卜。3．茶麸水还可杀灭蚯蚓。用茶麸水浇透盆土，稍过片刻，蚯蚓便会钻出土表，拣出除之。蚯蚓对兰花的功与过，兰界看法不一。一种看法，认为盆中的蚯蚓，活动时会破坏一些兰菌的菌丝、伤及兰根的根尖，是害虫，必须除之。另一种看法，认为兰盆中的蚯蚓，可吃掉兰盆中许多腐烂物质及兰花的烂根，蚯蚓的活动能起疏松土壤的作用，其粪便还可作为兰花的肥料，功大于过，不必杀之。孰是孰非，有待兰友们根据自己的实践观察，权衡利弊，加以判断。 蕙兰二、异味蔬菜（大葱、大蒜、韭菜、生姜、洋葱等） 异味蔬菜均有各自的异味，其气味能起杀虫灭菌的作用。防治方法：1．取25克大蒜，捣碎后挤汁，稀释在10升水中，立即喷洒兰株，可治蚜虫、红蜘蛛、介壳虫及灰霉病。将去皮大蒜压成小块，等距离放于兰盆表土，几天后蚯蚓、蚂蚁绝迹。2将切碎的大葱、水按1：30的比例浸泡一昼夜后过滤，用其喷洒兰株，一日喷数次，连续喷洒数天，对防治蚜虫、软体害虫及防治白粉病等均有良好的效果。3．用姜1斤，加水半斤，捣烂取汁，每斤汁液加水6斤，喷洒兰株，可防治蚜虫。4．将韭菜汁、清水按1：60的比例混合，用其喷洒兰株，每日喷2次，重复喷数天，可治愈黑斑病。5．取15克切碎的洋葱鳞茎，放入2市斤水中密封浸泡7小时后过滤，用滤液喷洒兰株，可治红蜘蛛、蚜虫。 三、烟头 烟叶中含烟碱3％左右。烟碱对害虫具有强烈的触杀和胃毒作用。取20来个吸剩的烟头和一份生石灰，加水搅拌浸泡过滤，再加入30份水，用其喷洒兰株、盆土和盆底，可消灭蚂蚁和其他体无蜡质的害虫。 四、洗衣粉和洗涤剂 洗衣粉能溶解介壳虫的角膜，同时形成一层泡沫裹住虫体，使介壳虫窒息而死。洗衣粉溶液能防治一些病虫害。防治方法：1．用少量温水溶化洗衣粉，再用水稀释至1000倍液，喷洒兰株，可杀灭蚜虫、粉虱、红蜘蛛。稀释至600倍液，三天喷一次，续喷三次，介壳虫全部死亡。2．将猪苦胆汁、清水按1：100的比例混合，并加入少量洗衣粉，用其喷洒兰株，可防治炭疽病和软腐病。用洗衣粉溶液喷洒兰株，待害虫死后，必须用清水冲洗叶片几次．以使兰株正常生长。 五、白酒 将白酒、水按1：2的比例混合，喷洒兰株，每周喷一次，续喷三次，可杀灭介壳虫。 六、柑桔皮 把柑桔皮放于盆底，可防止蚂蚁等害虫进入盆土中为害兰花。还可将柑桔皮切成碎末，撒在盆土表面，几天不浇水，可治蚜虫、介壳虫等。 七、红糖 将粉状红糖、开水按1：100的比例混合，凉后用红糖液喷洒兰株，每3天喷一次，续三次，对防治霜霉病、白粉病、黑斑病、叶枯病有较好的效果。 八、柴油 将柴油、水按1：60的比例调成乳剂，再以100倍水稀释后喷洒兰株，可治介壳虫等。 九、草木灰 将草木灰、水按1：50的比例浸泡两昼夜后过滤，用滤液喷洒兰株，既可治蚜虫，又能增加钾肥。 十、食醋 将食醋、清水按1：8倍的比例混合，用其均匀地喷洒兰叶正背面，可治介壳虫。如果介壳虫已成虫，可略为提高混合液的酸度，三天喷一次，续三次，就能杀灭己成虫的介壳虫。叶面喷洒食醋液还可消灭黑斑病、白粉病、叶斑病、黄化病等。工业用酸醋忌用。C、注意事项 伤口要防菌——换盆或分株时，根部有伤口，要先用杀菌剂涂抹伤口，防止病菌侵入。 盆子勿太大——小株栽大盆，植料用量多，容易导致通气不良，浇水也不易控制。若浇水吸水太多，植料不易干燥，细菌侵入引起烂根。 兰花要浅植——种植兰株不可太深，否则长期潮湿会腐烂。种植时，将植料填充根部、基部或假球茎必须露出。 根部要展开——种植兰花时根部要均匀展开，不可挤压在一起，这样每条根才能接触植料，通气也好。 数天不浇水——新种植的兰花，根部可能受伤，伤口涂了杀菌剂，3－5天不浇水，才能达到药效，也能促进新芽新根生长。 避免强光照——新种植兰花，都必须避免强光直射，以防脱水，应置于暖和而荫蔽的地方，可以用喷雾来提高空气中的湿度，直到兰花恢复正常生长。
植物组织培养及其应用研究概况在世界各国科学家的不断努力下，近几十年来，植物组织培养技术迅速发展。利用组织培养，不仅可以大量生产优良无性系，获得人类需要的多种代谢物质，还可获得单倍体、三倍体、多倍体及非整倍体。通过细胞融合可以打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲合性，在植物新品种的培育和种性的改良中发挥了巨大作用。组织培养的植物细胞是在细胞水平上分析研究的理想材料，从植物快繁、花药培养发展到细胞器培养、原生质融合以及DNA重组技术等，植物组织培养技术广泛应用于植物科学的各个领域及农业、林业、工业、医药等多种行业，已经成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。1 植物组织培养的基本概念、原理和试验步骤1．1概念植物组织培养是在无菌条件下，将离体的植物器官(根尖、茎尖等)、组织(形成层、花药组织等)、细胞(体细胞、生殖细胞等)、胚胎(成熟或未成熟的胚)、原生质体等在人工配制的培养基上培养，给予适宜的培养条件，诱发其产生愈伤组织或潜伏芽或长成完整的植株的技术。1．2原理 植物组织培养的依据是植物细胞的“全能性”及植物的“再生作用”。1902年，德国著名植物学家 G．Haberlandt根据细胞学理论提出了一个观点，“高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞，即植物体细胞，体细胞在适当的条件下具有不断分裂、繁殖并发育成完整植株的潜力”。1943年，美国人White在烟草愈伤组织中偶然发现形成一个芽，证实了G．Haberlandt的论点。 不同植物所需要的生长条件不同，所用的培养基也有所不同。较常用的基础培养基有MT、MS、 SH、N6、White等。在组织培养中，愈伤组织和胚状体能否形成是培育出新植株的关键。通过在基础培养基里添加一定浓度的外源激素，可以诱导出愈伤组织、胚状体、不定芽、根等器官，最终获得再生植株或次生物质。 用于植物组织培养的材料称为外植体，其主要形式有器官、胚胎、单细胞、原生质体等。根据外植体的不同，所需要的培养基种类、培养条件、外源激素的种类及比例等均不同。植物组织培养中，影响培养力的因素是多方面的，诱导愈伤组织成败的关键在于培养条件，植物激素是诱导愈伤组织和绿苗分化的关键因素。最常用的诱导愈伤组织的生长素是IAA、NAA和2，4一D，所需浓度为O．01～10 mg／L。最常用的细胞分裂素是KT和ABA，使用浓度为O．1～10 mg／L。KT的主要作用是促进细胞分裂和愈伤组织分化。ABA对植物体细胞胚的发生与发育具有重要作用。各类植物激素的生理作用虽有相对专一性，但是植物的各种生理效应是不同种类激素之间相互作用的综合表现。1．3试验步骤1．3．1选择和配制培养基 培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。1．3．2灭茵灭菌是组织培养中的重要工作之一，通常采用物理的或化学的灭菌方法。培养基用常压或高压蒸煮等湿热灭菌、器械采用灼烧灭菌、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌、不耐热的物质采用过滤灭菌、植物材料表面用消毒剂灭菌、物体表面用药剂喷雾灭菌、接种室等空间采用紫外线或熏蒸灭菌。1．3．3接种将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块放入培养基，整个接种过程要在无菌条件下进行。 ．4培养把培养材料放在有一定光照和温度等条件的培养室里，使之生长、分裂和分化，形成愈伤组织或进一步分化成再生植株。1．3．5试管苗驯化移栽 试管苗是在特殊环境条件下生长的幼苗，与自然生长的幼苗有很大差异，只有通过驯化，使之适应自然环境后才能移栽。2 植物组织培养的应用2．1植物快速繁殖和无病毒种苗生产植物快速繁殖技术始于20世纪60年代，法国的Morel用茎尖培养的方法大量繁殖兰花获得成功，从此揭开了植物快速繁殖技术研究和应用的序幕。目前，通过离体培养获得小植株并且具有快速繁殖潜力的植物已有100多科1 000种以上，有的已经发展成为工业化生产的商品。世界上80％～85％的兰花是通过组织培养进行脱毒和快速繁殖的。培养的植物种类也由观赏植物逐渐发展到园艺植物、大田作物、经济植物和药用植物等。在我国，同类的研究始于20世纪70年代。马铃薯无毒种薯和甘蔗种苗已在生产上大面积种植，30余种植物已进行规模化生产或中间试验。利用组织培养进行植物快速繁殖及无病毒种苗生产，不仅能够挽救珍惜濒危物种，而且能够解决植物野生资源缺乏的问题。2．2植物花药培养和单倍体育种 将植物花药培养成单倍体植株，再经过染色体加倍，能很快得到纯合的二倍体，这样将大大缩短育种年限。到目前为止，世界上通过花粉和花药培养已获得了几百种植物的单倍体植株。印度科学家应用这种方法培育的水稻品系，比对照产量提高15％～49％。韩国先后育成了5个优质、抗病、抗倒伏的水稻品种。我国自20世纪70年代开始该领域的研究，已经培育了40余种由花粉或花药发育成的单倍体植株，其中有10余种为我国首创。玉米获得了100多个纯合的自交系；橡胶获得了二倍体和三倍体植株。仅“九五”期间就育成高产、优质、抗逆、抗病的农作物新品种44个，种植面积超过660万 hm2。2．3植物胚胎培养杂交育种中，杂种胚常常败育，因此将早期生长的胚取出，应用组织培养方法，就有可能培育出杂交植物。已经有100篇以上幼胚培养成为植株的报道。国内外科学家应用植物胚胎培养技术获得了多种远缘杂交的重组体、栽培种和杂交品种。2．4植物愈伤组织或细胞悬浮培养利用植物愈伤组织或细胞悬浮培养可以生产用于预防和治疗疾病的植物次生代谢产物。近年来，这一领域的发展极为迅速，已经研究了400多种植物，从培养细胞中分离到600多种次级代谢产物，其中60多种在含量上超过或等于原植物，20种以上干重超过原植物的1 9，6。例如，从薯芋愈伤组织和悬浮细胞生产的diosgenin用于合成甾体药物。最近抗癌药物紫杉醇一红豆杉细胞培养物，可用75t发酵罐培养，已达到商业化生产水平。另外，达到商品化水平的还有紫草、人参、黄连、老鹳草等；长春花、毛地黄、烟草等已实现工业化生产；牙签草、红花等20多种植物正在向商品化过渡。2．5细胞融合与原生质体培养自1960年英国学者Cocking首次利用纤维素酶从番茄幼苗的根分离原生质体获得成功以来，到1990年已有100种以上植物的原生质体能再生植株。我国获得了30余个品种的原生质体再生植株，其中包括难度较大的重要粮食作物和经济作物，如大豆、水稻、玉米、小麦、谷子、高梁、棉花等。在木本植物、药用植物、蔬菜和真菌原生质体培养方面的进展也十分迅速。国外已先后获得了种内及种间的体细胞杂种植株。植物原生质体培养还可应用于外源基因转移、无性系变异及突变体筛选等研究，因而越来越受到人们的重视。2．6植物细胞突变体筛选植物细胞突变体的筛选最早始于1959年，G． Melchers在金鱼草悬浮细胞培养中获得了温度突变体。1970年，P．S．Carlson，H．Binding和Y．M． Heimer等分别分离出烟草营养缺陷型细胞、矮牵牛抗链霉素细胞系及烟草抗苏氨酸细胞系。迄今为止，已经在不少于15个科45个种的植物细胞培养中筛选出100个以上的植物细胞突变体或变异体。其中包括抗病细胞突变体，如玉米抗小斑病突变体和小麦抗赤霉病、根腐病突变体；抗氨基酸及其类似物细胞突变体，如甘蓝型油菜抗HYP突变体[263；抗逆境胁迫细胞突变体，如水稻耐盐突变体和小麦抗盐突变体；抗除草剂细胞突变体及营养缺陷型细胞突变体，如玉米抗除草剂变异体；株高突变体的筛选，如水稻矮秆变异体。2．7植物体细胞胚胎和人工种子1958年，Reinert在胡萝卜的组织培养中最先发现了体细胞胚胎(胚状体)。据不完全统计，能大量产生胚状体的植物有43科92属100多种。一些重要作物如水稻、小麦、玉米、珍珠谷等，也能通过离体培养产生胚状体。这些胚状体用褐藻酸钠等包埋，再加上人工种皮，就形成了人工种子。人工种子的优点是：繁殖快速，成苗率极高；不受气候影响，四季皆可工厂化生产。上世纪80年代初，美、日、法等国家相继开展了人工种子的研究，我国也于“七五”期间开展了此项研究，并于1987年列入了国家“863”高技术研究发展计划。2．8 植物组织细胞培养物的超低温保存与种质库建立植物细胞全能性的发现和证实，为植物种质资源的长期保存开辟了一条新途径。采用液氮超低温保存技术，能保持很高的存活率，并且能再生出新植株和保持原来的遗传特性。如建立茎尖分生组织培养物的超低温保存种质库，不仅可以防止种质的遗传变异和退化，而且可以长期保存无病毒的原种。2．9 植物组织培养与转基因技术的应用 我国第一个T—DNA插入突变体库的构建和研究为我国水稻功能基因组学研究奠定了良好的技术和材料基础，为确保我国拥有一批有自主知识产权的基因资源做出了积极贡献。由中国水稻研究所农业部水稻生物学重点开放实验室和中科院上海植物生理研究所合作，通过建立大规模、高效的农杆菌介导的转基因技术体系，将玉米转座子Ac—Ds等外源基因导入水稻未成熟胚和种子诱导的愈伤组织，获得了1．2万个独立的T—DNA插入株系，并构建了水稻突变体的数据库。 3 展望植物组织培养研究与应用是20世纪科技进步的重大成果之一，为研究植物生长发育、抗性生理、激素及器官发生与胚胎发生等提供了许多良好的实验材料和有效途径。植物组织培养方法不断提高的同时，也相应拓宽了其应用范围。由于组织培养在人工控制的条件下进行，容易掌握花芽分化和开花成因；通过胚胎培养，能够得到杂种或自交种；通过分离单倍体细胞，能培育纯合的二倍体优良品系；提高育种多样性的同时缩短了育种时间；通过突变体筛选，提高植物的品质，增强抗逆境胁迫能力，扩大植物的生长范围；将体细胞冷藏在低温下，建立基因库，达到保存物种的目的；获得药用价值高和工业生产所需要的次生产物，加快药物生产的时间并且减少了单纯依靠天然植物的被动性。植物组织培养技术已经渗透到科研、生产和生活各个领域，必将日臻完善。黑龙江农业科学2006，(3)
兰花组织培养研究论文
玩家繁殖兰花主要是自然制 养护管理注意温度；湿度；通风；浇水这几方面就可以了
细胞工程在高效利用药用植物资源方面有何优势细胞工程作为科学研究的一种手段，已经渗入到生物工程的各个方面，成为必不可少的配套技术。在农林、园艺和医学等领域中，细胞工程正在为人类做出巨大的贡献。1、粮食与蔬菜生产利用细胞工程技术进行作物育种，是迄今人类受益最多的一个方面。中国在这一领域已达到世界先进水平，以花药单倍体育种途径，培育出的水稻品种或品系有近百个，小麦有30个左右。其中河南省农科院培育的小麦新品种，具有抗倒伏、抗锈病、抗白粉病等优良性状。在常规的杂交育种中，育成一个新品种一般需要8～10年，而用细胞工程技术对杂种的花药进行离体培养，可大大缩短育种周期，一般提前2～3年，而且有利优良性状的筛选。前面已介绍过的微繁殖技术，在农业生产上也有广泛的用途，其技术比较成熟，并已取得较大的经济效益。例如，中国已解决了马铃薯的退化问题，日本麒麟公司已能在1000升容器中大量培养无病毒微型马铃薯块茎作为种薯，实现种薯生产的自动化。通过植物体细胞的遗传变异，筛选各种有经济意义的突变体，为创造种质资源和新品种的选育发挥了作用。现已选育出优质的番茄、抗寒的亚麻、以及水稻、小麦、玉米等新品系。有希望通过这一技术改良作物的品质，使它更适合人类的营养需求。蔬菜是人类膳食中不可缺少的成分，它为人体提供必需的维生素、矿物质等。蔬菜通常以种子、块根、块茎、插扦或分根等传统方式进行繁殖，化费成本低。但是，在引种与繁育、品种的种性提纯与复壮、育种过程的某些中间环节，植物细胞工程技术仍大有作为。例如，从国外引进蔬菜新品种，最初往往只有几粒种子或很少量的块根、块茎等。要进行大规模的种植，必须先大量增殖，这就可应用微繁殖技术，在较短时间内迅速扩大群体。在常规育种过程中，也可应用原生质体或单倍体培养技术，快速繁殖后代，简化制种程序。另外，还可结合植物基因工程技术，改良蔬菜品种。2、园林花卉在果树、林木生产实践中应用细胞工程技术主要是微繁殖和去病毒技术。几乎所有的果树都患有病毒病，而且多是通过营养体繁殖代代相传的。用去病毒试管苗技术，可以有效地防止病毒病的侵害，恢复种性并加速繁殖速度。目前，香蕉、柑橘、山楂、葡萄、桃、梨、荔枝、龙眼、核桃等十余种果树的试管苗去病毒技术，已基本成熟。香蕉去病毒试管苗的微繁殖技术已成为产业化商品化的先例之一。因为香蕉是三倍体植物，必须通过无性繁殖延续后代，传统方法一般采用芽繁殖，感病严重，繁殖率低；而采用去病毒的微繁殖技术不仅改进了品质，亩产量约提高30%～50%，很容易被蕉农接受。近年来，对经济林木组织培养技术的研究也受到很大的重视。采用这一技术可比常规方法提前数年进行大面积种植。特别是有些林木的种子休眠期很长，常规育种十分费时。据不完全统计，现已研究成功的林木植物试管苗已达百余种，如松属、桉树属、杨属中的许多种，还有泡桐、槐树、银杏、茶、棕榈、咖啡、椰子树等。其中桉树、杨树和花旗松等大面积应用于生产，澳大利亚已实现桉树试管苗造林，用幼芽培养每年可繁殖40万株。植物细胞工程技术使现代花卉生产发生了革命性的变化。1960年，科学家首次利用微繁殖技术将兰花的愈伤组织培养成植株后，很快形成了以组织培养技术为基础的工业化生产体系——兰花工业。现在，世界兰花市场上有150多种产品，其中大部分都是用快速微繁殖技术得到的试管苗。从此，市场供应摆脱了气候、地理和自然灾害等因素的限制。至今，已报道的花卉试管苗有360余种。已投入商业化生产的有几十种。中国对康乃馨、月季、唐昌蒲、菊花、非洲紫罗兰等品种的研究较为成熟，有的也已商品化，并有大量产品销往港澳及东南亚地区。3、临床医学与药物自1975年英国剑桥大学的科学家利用动物细胞融合技术首次获得单克隆抗体以来，许多人类无能为力的病毒性疾病遇到了克星。用单克隆抗体可以检测出多种病毒中非常细微的株间差异，鉴定细菌的种型和亚种。这些都是传统血清法或动物免疫法所做不到的，而且诊断异常准确，误诊率大大降低。例如，抗乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的单克隆抗体，其灵敏度比当前最佳的抗血清还要高100倍，能检测出抗血清的60%的假阴性。近年来，应用单克隆抗体可以检查出某些还尚无临床表现的极小肿瘤病灶，检测心肌梗死的部位和面积，这为有效的治疗提供方便。单克隆抗体并已成功地应用于临床治疗，主要是针对一些还没有特效药的病毒性疾病，尤其适用于抵抗力差的儿童。人们正在研究“生物导弹”——单克隆抗体作载体携带药物，使药物准确地到达癌细胞，以避免化疗或放射疗法把正常细胞与癌细胞一同杀死的副作用。单克隆抗体可以精确地检测排卵期。新一代免疫避孕药也在研制之中，其基本原理是用精子，卵透明带或早期胚胎来制备单克隆抗体，将它们注入妇女体内，人体就会产生对精子的免疫反应，从而起到避孕作用。人类体外受精技术的日趋成熟，使人类对生育活动有了较大的选择余地，促进优生优育，提高人口素质，也为不孕症患者或不宜生育的人带来福音。生物药品主要有各种疫苗、菌苗、抗生素、生物活性物质，抗体等，是生物体内代谢的中间产物或分泌物。过去制备疫苗是从动物组织中提取，得到的产量低而且很费时。现在，通过培养、诱变等细胞工程或细胞融合途径，不仅大大提高了效率，还能制备出多价菌苗，可以同时抵御两种以上的病原菌的侵害。用同样的手段，也可培养出能在培养条件下长期生长、分裂并能分泌某种激素的细胞系。1982年美国科学家用诱变和细胞杂交手段，获得了可以持续分泌干扰素的体外培养细胞系，现已走向应用。4、繁育优良品种目前，人工受精、胚胎移植等技术已广泛应用于畜牧业生产。精液和胚胎的液氮超低温（-196摄氏度）保存技术的综合使用，使优良公畜、禽的交配数与交配范围大为扩展，并且突破了动物交配的季节限制。另外，可以从优良母畜或公畜中分离出卵细胞与精子，在体外受精，然后再将人工控制的新型受精卵种植到种质较差的母畜子宫内，繁殖优良新个体。综合利用各项技术，如胚胎分割技术、核移植细胞融合技术、显微操作技术等，在细胞水平改造卵细胞，有可能创造出高产奶牛、瘦肉型猪等新品种。特别是干细胞的建立，更展现了美好的前景。
收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.
A、方法 分开的兰丛，不要拆得太零星，每丛至少有3—5苗，最好是一年生植株、二年生植株和三年生植株保留在 品种8同一丛中。 (1)垫盆。盆底用—块瓦片盖住排水孔，再用砖块，瓦片或贝壳逐步填充，其中大隙缝填充以泥粒或豆石，一般约为盆内高度的1／2—1／3。上余的净高约10—15厘米，留作培养土层。其具体高度应根据兰花的种类及兰根的长短和盆的高矮而定。铺垫物不要填得太密太实，应保留一点孔隙。实践证明，有的新根能在铺垫层的孔隙中生长良好。 (2)栽植。在铺垫层上，先填上2—3厘米的培养土，用手稍压实，即可将兰花正立摆布其上，根据植株与花盆大小，可以几个单株、2丛、3丛或更多丛种在一个盆里。3丛宜栽成鼎足之势。4丛可栽成四方形，五丛宜列成梅花形。兰根要自然舒展，叶片要四方披拂。要缓缓地将兰根放入盆内，使兰根自然舒展，尽量不与盆内壁碰擦。 兰株入盆后，就逐步固定兰株姿势。—盆栽一丛的，应使老假鳞茎偏居一侧，使新芽有发展的余地。 一盆栽数丛的，每丛的老假鳞茎应相对地集于盆之中间，使新根新芽向外发展各有足够的空间。 (3)填土。栽植时，一手扶叶，一手添加营养土，执住兰株基部稍往上提，以舒展根系，同时摇动兰盆。让培养土深入根际；继续添土，并摇动兰盆，调整兰株的位置和高度。用手沿盆边按压，但切勿过重而伤根，继续添土并挤压，直至盆面土壤高出盆口2—3厘米，略呈馒头形。培养土应将全都兰根盖住，掩至假鳞茎基部， 填土的深浅，传统认为：春兰宜浅，惠兰宜深，但一般以不埋及假鳞茎上的叶基为度。新发兰花在山野里 品种9生长时，植株上留下了土表上下的明显标志，可以此标志为准。花盆的大小也要和植株的大小、多少相称，既不要盆大而株小又少，也不宜盆小而株大又多。一般植株的数量，以预计2—3年后刚好长满盆为原则。植株大小与盆的高度相称。既利于生长，又符合观赏要求。 (4)铺面。栽植完毕后，可在盆土表面铺上一层小石粒或青苔，最好是林下优质苔藓，既美观、又可调节水分，还可保护叶面不被泥水污染，新芽也不致感染泥土中病菌而烂心；此外，还可减缓雨水对盆土的冲刷，保持盆土疏松。 (5)浇水。栽植完成后，即浇第一遍水，必须让盆土湿透，水滴宜小，冲力忌大。若置于水盆中浸水、切不可浸泡太久。盆土一经浸湿，立即将兰盆搬出，然后移置于荫蔽之处养护。B、栽培和病虫害 1。试管栽培： 随着兰花组织培养技术和无菌播种技术的不断发展，兰花在试管内开花的现象正日益受到重视。这一现象之所以能吸引育种学家的目光，主要原因是原来需要常规栽培许多年才能开花的人工杂交新品种，现在在试管里，通过1~2个培养周期就能人为地促使其开花，这样就可以根据开花的情况有目的地选育具有优良性状的个体，淘汰相对较差的个体，从而使整个育种的周期缩短，并大大减轻大量栽培未见花品种的工作量，使育种工作更富有针对性。 由于我们长期从事的是兰属植物中几种常规栽培的地生兰种的开发和研究，因此下面提及的兰花，均是指这几个兰种而言，包括春兰、建兰、春剑、莲瓣、蕙兰、寒兰等。 兰花在试管内开花的方式，根据目前的观察结果，大概可以分为三种类型。第一类是由兰苗的腋芽发育成花芽，这种方式跟常规栽培中兰花的开花方式是一样的，只不过常规栽培是一丛苗起花，试管内是单苗起花而已，这种情况在建兰中比较普遍，春兰春剑等品种中比较少见。第二类是兰苗的顶芽发育成花芽，类似通常所说的草中箭（ 草心箭），花由兰苗最中心长出，这种情况在各个兰种中都有出现，尤其是在春兰中常见。第三类是由原球茎的顶端直接分化出花芽，这类方式完全由培养基内的激素水平控制，起花快而整齐，分化频率高，是目前主要的诱导起花方式。 兰花在试管内开出的花朵，基本的品种特征是不会改变的，例如素心品种开素花,绝不会开彩花。凡是有香味的品种,试管内的花也是有香味的,并且香味浓郁,不亚于盆栽兰花的香味,这一点可能出乎很多人的意料。由于试管内的温度等环境条件的原因,花期通常只有几天时间,不如盆栽兰花开花持久，在低温条件下，花期则可以大大延长。兰花在试管内开出畸形花的比例是比较高的，有些品种可以达到10~20%。一般来讲，这些畸形花通常都是生理性的原因和外部培养条件的原因造成的，例如激素水平、无机盐等理化因素，而不是遗传上的相应改变，因此这些畸形花的出现，在遗传和育种上毫无意义。我们曾追踪观察过很多的奇花品系，希望能从中选出新的优良品种，结果绝大多数以后又开出了正常花，真正能稳定的是极少的。 一个对兰花培育者十分有用的现象是，试管内开出的花，多数情况下，合蕊柱都能正常发育，具有正常的授粉能力和结实能力，我们曾镜检过小孢子的发育过程，发现其减数分裂过程和花粉粒的形成过程基本是正常的。尤其是以腋芽的方式开出的花，授粉后结出的果实很容易正常发育至种子成熟，并且这些在试管内结出的种子，有一定的发芽能力，尽管发芽率比盆栽兰花的种子的发芽率低，但对育种者来说，已经足够了。 随着技术水平的不断进步，人们控制兰花在试管内开花的能力越来越强，这无疑会对兰花的杂交育种工作产生积极而深远的影响。由于兰花的主要欣赏点在花艺上，一个未知的品种，在开花前也基本无法从叶片上判断其优劣，所以育种工作者不仅要选择合适的优良亲本做杂交并且培育出小苗，还不得不把这些小苗，不论好坏，一古脑地种进温室，苦等数年至开花，才能从中筛选优秀单株。这一过程的工作量是很大的。即使获得了优秀的单株，很不幸的是每一个单株的数量也是非常少的，通常只有几苗，根本满足不了市场需求，还必须以这一优秀单株为外植体，再从头做一次组培。从开始作杂交工作，到最后有商品苗供应市场，这一过程要经历两次组培周期，两次从瓶苗到开花的栽培周期，一般要十多年的时间。而试管内开花技术的完善，使我们不必经过栽培过程，就可以在试管内筛选优良株系，并且一旦选出，可以直接进行快繁，不必再经过原球茎的诱导过程，使整个育种周期缩短将近一倍的时间。 兰花在试管内开花带来的另一便利之处是使兰花的瓶内杂交成为可能，这是一个全新的应用研究领域。有些育种工作，需要进行反复的杂交，回交和自交，才能实现育种目的，选育出优良的新品种。例如素心品种和梅瓣品种的杂交，子一代通常是梅瓣但肯定不是素心，这就需要子一代和素心亲本回交一次，或者子一代自交一次，再从子二代中选择素心梅瓣。采用常规办法，这一过程肯定要用十几年时间，现在有了促使兰花试管内开花的方法，我们就可以在试管内让子一代开花，并且在试管内进行自交授粉或子一代植株之间相互授粉，并培养出种子。这些种子无需消毒直接播种于培养基上，获得子二代，再诱导出花，即可从子二代中间选择想要的品种了。这一过程比常规方法，至少可以节省两个从瓶苗到开花的栽培周期。 另外，由于试管内开花不受季节限制，可以随时诱导，这就为不同季节开花的兰花品种或者是花期不遇的兰花品种之间的杂交提供了很大的便利。换句话来说，试管里开花的兰花，为杂交育种工作提供了稳定的花粉源。依据这一思路，我们在很大程度上摆脱了开花季节的限制和种源数量的限制（有些数量很少的品种，要见一次花可能要等很多年的时间，并且开花时不一定有非常合适的其它亲本材料同时开花），已经成功地实现了不同季节开花的兰花品种之间的杂交。 目前而言，兰花这一领域的研究工作，尚处在刚刚起步的阶段，还有很多不尽人意之处，并不是每个品种都能诱导出花，也不是每个品种都能达到需要的成花率，更没有一个现成的程序能让所有的品种开出花来，每一个品种都需要进行大量的试验和摸索。但这些基本都是技术性的问题，相信随着技术的进步，随着更多的有识之士加入到这一领域的研究和开发中来，这些问题会逐步得到解决。 2。繁殖方法： 兰花常用分株、播种及组织培养繁殖。 a．分株：在春秋两季均可进行，一般每隔三年分株一次。凡植株生长健壮，假球茎密集的都可分株，分株后每丛至少要保存5个连结在一起的假球茎。分株前要减少灌水，使盆土较于。分株后上盆时，先以碎瓦片覆在盆底孔上，再铺上粗石子，占盆深度1／5至1／4，再放粗粒土及少量细土，然后用富含腐殖质的沙质壤土栽植。栽植深度以将假球茎刚刚埋入土中力度，盆边缘留2厘米沿口，上铺翠云草或细石子，最后浇透水，置阴处10～15天，保持土壤潮湿，逐渐减少浇水，进行正常养护。 b．播种繁殖：兰花种子极细，种子内仅有一个发育不完全的胚，发芽力很低，加之种皮不易吸收水分，用常规方法播种不能萌发，故需要用兰菌或人工培养基来供给养分，才能萌发。播种最好选用尚未开裂的果实，表面用75％的酒精灭菌后，取出种子，用10％次氯酸钠浸泡5～10分钟，取出再用无菌水冲洗3次即可播于盛有培养基的培养瓶内，然后置暗培养室中，温度保持25C左右，萌动后再移至光下即能形成原球茎。从播种到移植，需时半年到一年。组织培养已获成功，有条件的地方可用此法繁殖。 3。繁殖技术 a. 场地选择: 要求四周空旷，通风良好，并靠近水面，空气湿润，无煤烟污染。场地的西南面，可种常绿阔叶树，郁闭度应在0．7左右，这样可减少午后阳光照射，调节湿度与温度。 b．浇水: 以雨水或泉水为宜，不宜用含盐碱的水，如用自来水，应将水搁置数天后使用。浇水要看气温情况而定，春季浇水量宜少，夏季宜多；梅雨季节正值兰花抽生叶芽，盆土宜稍干；秋后天气转凉，浇水量酌减，保持湿润即可。冬季在室内宜干，减少浇水次数，且宜于中午时浇。兰花可淋小雨，但连续下雨或暴雨则易烂心、烂叶，故须注意防雨。 蕙兰c．施肥: 栽兰宜用饼肥，以草木灰4份、豆饼10份、骨粉10份混合拌匀，放于缸内，分几次加水，使豆饼浸涨为止，后加盖密封，经一年腐熟，再制成干粒。使用时放于盆面即可。如用全粪，也应经一年腐熟，掺水冲淡滤渣使用。一般从5月开始施肥，至立秋停肥，掌握薄肥多施。施肥应在傍晚进行，第二天清晨再浇1次清水。 d．遮阳及防寒: 除早春及冬季外，都要放在露天棚下。荫棚要求通风良好，兰花在3～4月间刚出房时，可以多晒太阳，以后蔽荫时间渐增。冬季兰花须搬入室内防寒，室温保持1C～2C即可。另外，兰花在春季出房后，秋季进房前，也要注意防霜。 4.病虫害防治 a. 通常使用的方法： 兰花的主要病虫害有： （1）白绢病：多发生于梅雨季节。应注意通风透光，盆土排水良好予以预防，发病后可去掉带菌盆土，撒上五氯硝基苯粉剂或石灰即可。 （2）炭疽病：终年都有，高温多雨季节更为猖极。防治方法除改善环境条件外，发病期可先用50％甲基托布津可湿性粉剂800～1500倍液喷治，7～10天互次，然后再辅以l％等量式波尔多液，每半月1次。 （3）蚧壳虫：在高温多湿、空气流动不畅的情况下，繁殖最快。用常规法防治。 综上所述，要养好兰花，必须掌握其自然生长环境条件，采取合理措施，加强养护管理。据《养兰诀》载：“春不出，夏不日，秋不于，冬不湿”，这便是我国养兰经验之概括。 b. 无公害防治病虫害方法： 兰花的病虫害，近代多使用化学农药防治。农药使用过量，兰花易遭药害。长期单一使用化学农药或使用次数频繁，会使害虫病菌产生抗药性而起不到防治效果。喷洒农药时还会污染环境，严重者会使人畜中毒。无公害防治兰花病虫害自古有之，近代也屡见不鲜。兰花病虫害无公害防治具有行之有效、成本低廉、取材容易、方法简便、不会污染、无副作用等诸多优点，值得提倡。下面介绍一些民间流传的无公害防治兰花病虫害的小验方。“小”验方，往往也许能够解换“大”问题，兰友们不妨一试。 一、茶麸 茶麸，也称茶枯、茶籽饼，系茶籽榨油后剩下的渣料，农民常用来洗涤衣服。茶麸中含有皂素和糖苷，其水浸出液里碱性，对害虫有很好的胃毒和触杀作用。防治方法：1．将捣碎成粉状的茶麸、沸水按1：5的比例浸泡一昼夜，用其淋浇兰盆，同时淋浇兰盆放置的场所及其他兰盆，对蜗牛有较好的防治作用。2．用茶麸水喷洒兰株，对蚜虫和红蜘蛛的防治效果很好，可达90％以卜。3．茶麸水还可杀灭蚯蚓。用茶麸水浇透盆土，稍过片刻，蚯蚓便会钻出土表，拣出除之。蚯蚓对兰花的功与过，兰界看法不一。一种看法，认为盆中的蚯蚓，活动时会破坏一些兰菌的菌丝、伤及兰根的根尖，是害虫，必须除之。另一种看法，认为兰盆中的蚯蚓，可吃掉兰盆中许多腐烂物质及兰花的烂根，蚯蚓的活动能起疏松土壤的作用，其粪便还可作为兰花的肥料，功大于过，不必杀之。孰是孰非，有待兰友们根据自己的实践观察，权衡利弊，加以判断。 蕙兰二、异味蔬菜（大葱、大蒜、韭菜、生姜、洋葱等） 异味蔬菜均有各自的异味，其气味能起杀虫灭菌的作用。防治方法：1．取25克大蒜，捣碎后挤汁，稀释在10升水中，立即喷洒兰株，可治蚜虫、红蜘蛛、介壳虫及灰霉病。将去皮大蒜压成小块，等距离放于兰盆表土，几天后蚯蚓、蚂蚁绝迹。2将切碎的大葱、水按1：30的比例浸泡一昼夜后过滤，用其喷洒兰株，一日喷数次，连续喷洒数天，对防治蚜虫、软体害虫及防治白粉病等均有良好的效果。3．用姜1斤，加水半斤，捣烂取汁，每斤汁液加水6斤，喷洒兰株，可防治蚜虫。4．将韭菜汁、清水按1：60的比例混合，用其喷洒兰株，每日喷2次，重复喷数天，可治愈黑斑病。5．取15克切碎的洋葱鳞茎，放入2市斤水中密封浸泡7小时后过滤，用滤液喷洒兰株，可治红蜘蛛、蚜虫。 三、烟头 烟叶中含烟碱3％左右。烟碱对害虫具有强烈的触杀和胃毒作用。取20来个吸剩的烟头和一份生石灰，加水搅拌浸泡过滤，再加入30份水，用其喷洒兰株、盆土和盆底，可消灭蚂蚁和其他体无蜡质的害虫。 四、洗衣粉和洗涤剂 洗衣粉能溶解介壳虫的角膜，同时形成一层泡沫裹住虫体，使介壳虫窒息而死。洗衣粉溶液能防治一些病虫害。防治方法：1．用少量温水溶化洗衣粉，再用水稀释至1000倍液，喷洒兰株，可杀灭蚜虫、粉虱、红蜘蛛。稀释至600倍液，三天喷一次，续喷三次，介壳虫全部死亡。2．将猪苦胆汁、清水按1：100的比例混合，并加入少量洗衣粉，用其喷洒兰株，可防治炭疽病和软腐病。用洗衣粉溶液喷洒兰株，待害虫死后，必须用清水冲洗叶片几次．以使兰株正常生长。 五、白酒 将白酒、水按1：2的比例混合，喷洒兰株，每周喷一次，续喷三次，可杀灭介壳虫。 六、柑桔皮 把柑桔皮放于盆底，可防止蚂蚁等害虫进入盆土中为害兰花。还可将柑桔皮切成碎末，撒在盆土表面，几天不浇水，可治蚜虫、介壳虫等。 七、红糖 将粉状红糖、开水按1：100的比例混合，凉后用红糖液喷洒兰株，每3天喷一次，续三次，对防治霜霉病、白粉病、黑斑病、叶枯病有较好的效果。 八、柴油 将柴油、水按1：60的比例调成乳剂，再以100倍水稀释后喷洒兰株，可治介壳虫等。 九、草木灰 将草木灰、水按1：50的比例浸泡两昼夜后过滤，用滤液喷洒兰株，既可治蚜虫，又能增加钾肥。 十、食醋 将食醋、清水按1：8倍的比例混合，用其均匀地喷洒兰叶正背面，可治介壳虫。如果介壳虫已成虫，可略为提高混合液的酸度，三天喷一次，续三次，就能杀灭己成虫的介壳虫。叶面喷洒食醋液还可消灭黑斑病、白粉病、叶斑病、黄化病等。工业用酸醋忌用。C、注意事项 伤口要防菌——换盆或分株时，根部有伤口，要先用杀菌剂涂抹伤口，防止病菌侵入。 盆子勿太大——小株栽大盆，植料用量多，容易导致通气不良，浇水也不易控制。若浇水吸水太多，植料不易干燥，细菌侵入引起烂根。 兰花要浅植——种植兰株不可太深，否则长期潮湿会腐烂。种植时，将植料填充根部、基部或假球茎必须露出。 根部要展开——种植兰花时根部要均匀展开，不可挤压在一起，这样每条根才能接触植料，通气也好。 数天不浇水——新种植的兰花，根部可能受伤，伤口涂了杀菌剂，3－5天不浇水，才能达到药效，也能促进新芽新根生长。 避免强光照——新种植兰花，都必须避免强光直射，以防脱水，应置于暖和而荫蔽的地方，可以用喷雾来提高空气中的湿度，直到兰花恢复正常生长。
兰花组培快繁的研究进展论文
植物组织培养前景园艺植物组培苗工厂化生产能快速将优良品种转化为现实生产力，在遗传育种、种质资源保护、次生代谢物利用上也将有很大的发展潜力。只要选好优良品种，合理布局、节约成本，组培产业将会有蓬勃的发展和广阔的前景。2．1 花卉种苗产业化生产 花卉业是21世纪的希望产业，是社会经济发达与文明程度的重要标志，我国目前花卉需求量以每年35％～40％的速度递增。在花卉生产方面，种苗质量在栽培生产中的重要性日益明显，因此花卉种苗工厂化生产是花卉种苗生产的主要途径。2．2蔬菜种苗生产及脱毒马铃薯、食用百合、大蒜等是人们餐桌上的主要蔬菜，消费量和种植面积均很大，也是我国出口创汇的主要品种。这些品种随种植年限的增加，易受病毒感染，产量、品质逐年下降，运用组培脱毒技术可迅速恢复品种种性，提高生产力。2．3瓜果组培苗产业化草莓果实中所含的鞣花酸具有抗癌效果，且草莓易栽培、产量高、经济效益好，因此在江浙一带发展迅速。但草莓易感染各种病毒病，感病的果实畸形、品质差，一般减产30%～80%。对草莓进行热处理结合分生组织培养脱毒，去病毒苗可增产1000kg／667m2，品质有较大提高。甜瓜以肉质细脆、香气浓郁、味道甘甜而深受人们喜爱，效益较高，但长期种植会使品质退化和混杂。可从大田健壮植株上取嫩梢，作为外植体组培生产出优良种苗，其生产性状优于种子苗，虽具有缓苗时间较长，苗早期生长势弱的特点，但缓苗以后的种子苗生长更日壬，后期能超过种子苗，且苗期较短，开花结果期提前，整齐度大大提高，性状一致，瓜的成品率明显提高，完全保持所采植株的优良性状，无退化和变异现象发生。欧美葡萄是当前最热门的葡萄品种，果粒大、甜度高、价格昂贵、经济效益高，如运用组织培养快速繁殖技术大量生产将具有良好的发展前景。植物组织培养在园艺植物上的应用：采用植物组织培养中的脱毒技术使园艺植物产量大幅度提高，且品质得到改善。很多作物因受病毒感染，产量和质量下降，有些创汇作物失去了国际贸易的竞争优势，如大蒜、百合、薄荷等。利用脱毒技术，可大幅度提高产量。大蒜的蒜头直径由4．7cm增加到7．2cm，增长2．5cm，蒜头重由29．2g／个提高到75．8g／个，平均增重近46g／个。草莓经脱毒后增产20％～30％，品质提高，脱毒苗生长快、长势旺、茎叶粗壮、抗病耐高温、抗寒性能强、寿命延长。美国在试管内生产脱毒马铃薯种子，1b种子可代替1t种薯，该项成果每年获利2亿美元。我国近两年生产和推广脱毒薯，解决了马铃薯退化，无毒种薯已在主产区普及，推广种植面积达66．67万hm2，增产幅度在30％～40％以上，每年增效2．5亿元。脱毒马铃薯已在日本、荷兰、越南等国大面积应用。日本脱毒草莓种植面积达11．33万hm2，占生产总面积的80％以上，产量提高l 5％～30％，可增加产值11亿日元。 植物组织培养及产业化生产发展迅速。由于试管苗繁殖周期短、繁殖系数高且不受季节限制，便于工厂化生产。20世纪80年代初在全世界范围内，利用植物组织和细胞培养技术，形成了一个新兴的产业，如美国的兰花试管苗生产及荷兰的花卉试管苗生产。 单倍体育种通过花药或花粉的离体培养诱导产生单倍体植株，然后对它们进行染色体加倍，可得到纯系。在作物育种上应用这一技术可以加快纯合，降低误选，缩短育种年限。花药培养自20世纪60年代获得植株以来，发展很快，取得很大成绩。首先获得小麦、玉米、橡胶、柑桔等10多种作物花培植株，并已培育出小麦、水稻、烟草等花培新品种50多个，例如水稻品种新秀、单丰1号、花育1号等及中科院作物所李梅芳等培育的中花号、北京市农科院培育的京花号、吉林农科院培育的吉粳号、辽宁省盐碱地所培育的花粳45等。小麦品种京花1号、花培l号、京花3号等均推广应用于生产，其中小麦品种京花3号推广面积达6万hm2。 选育玉米自交系通常需要连续自交多代，花费大量的人力物力，用花药培养单倍体植株，再经染色体加倍即可得到纯合的自交系。广西农校1983年用该技术育成了自交系花83—2。我国已获得100多个玉米花培纯系，并已配制出优良组合应用于生产。 利用单倍体植株作为诱变材料，无论诱变突变是显性还是隐性，在处理当代即可看到，优良变异一经选出，经染色体加倍就可得到纯系，可以提高诱变育种的效果。 目前，花药培养技术已成为加快育种进程的有效手段，人们正在对该技术进行更深入地研究。魏小平等试验表明，在诱导愈伤组织阶段加入CPPU可提早小麦花药出愈时间，对于难培养的材料有显著的诱导作用，所诱导的愈伤组织易分化绿苗。辽宁省盐碱地利用研究所试验表明，水稻 MS分化培养基中加入适量MET可提高绿苗分化率及幼苗素质。王培等研究发现，染色体的加倍时期对冬小麦花粉植株的结实率有影响。 远缘杂交育种 远缘杂交的双亲由于遗传特性有显著差异，常造成杂交不亲和或杂种胚发育不全、中途天亡等情况。通过子房和胚的离体培养与试管离体受精可以克服远缘杂交不亲和；如果在杂种胚发育的适当时期取出胚进行离体培养，可能获得杂种幼苗，得到远缘杂交后代。目前已有100多种植物培养成功，并应用于作物育种或生产。例如日本育成大白菜和甘蓝杂种一白蓝，该品种具有大白菜和甘蓝双亲优点。中国农科院作物所用类似的方法得到了小麦与玉米的杂交植株。中国农科院蔬菜花卉研究所方智远等通过幼胚培养，已获得萝卜与甘蓝的杂交1代和回交1、2、3、4代材料。北京市农林科学院通过胚胎培养技术培育出早3号早熟桃，比亲本早上市半个月左右。组织培养用于远缘杂交来创造新的物种资源在小麦、蔬菜上开展的较好，在水稻上的研究尚少，应加强。 无性系变异的筛选体系胞在离体条件下及离体培养前会发生各种变异，筛选优良的无性系变异可育成新品种。如果植株的某一部分组织细胞中发生了变异，将该部分分离下来进行离体培养，可获得再生植株，进而培育成品种。在培养基中施加某种选择压力，从中筛选无性系变异培养新品种已在许多作物上获得成功，该技术特别适于抗性育种。河北师范大学生物系利用小麦成熟胚诱导愈伤组织，然后转入含0．5％氯化钠培养基上进行耐盐筛选，继而转入含盐分化培养基上获得小麦耐盐突变体RS8901—17，经鉴定连续3 a耐盐力均为一级，且矮秆丰产；山东农科院原子能所利用γ射线照射小麦幼胚离体培养出愈伤组织，选育出体细胞无性系变异新品种核生2号，表现高产优质。筛选无性系变异在个体水平上的诱变与常规变异相比，具有变异频率高、稳定快并可在室内有控制地进行，节省人力物力和财力，提高选择效率等优点。 组织培养应用于脱毒苗的培养与快速繁殖 利用植物生长点进行组织培养成幼苗，从而获得无病毒植株，这在国外20世纪50年代已经育成并投人生产，我国70年代开始这方面的试验。1990年马铃薯无病毒种苗栽培面积已占全国总面积的1／10，脱毒苗一般增产50％~100％，表现为茎秆粗壮、叶色浓绿、光合效率高、抗病性强、产量高。目前，为了提高脱毒效果，降低成本，人们又在探索更有效的脱毒技术和种苗繁殖技术。 经济作物及观赏植物的快速繁殖日趋火热。许多名贵花卉由于种子败育，扦插成活率低而难以繁殖，应用组织培养可以快速繁殖，批量生产，提高经济效益，也挽救了优良物种。美国、新加坡、泰国建立了几十家兰花快繁工厂，日本草莓试管苗种植面积超过11万hm2，据1990年统计，我国快速繁殖的植物已达443种，已有100多个机构采用快速繁殖技术进行工厂化大规模商品生产，其中月季、菊花、非洲紫罗兰、蝴蝶兰、马蹄莲、朱顶红等已用于生产。 组织培养应用于种质资源的保存和基因库的建立 生命物质的保存，已引起许多科研工作者的兴趣，其中包括原核生物、植物及动物材料的保存，种质保存的目的是为了确保有用的种质能在任何时候都具有生命力。组织培养能安全地保存植物的细胞、愈伤组织或分生组织，且在储藏几年后，仍能稳定地产生再生过程。通过无性系繁殖保存作物已成为迫切要求，尤其对于热带作物。另外，由于自然和人为的破坏，许多具有或可能具有育种价值的能成为基因库的品系在消失，作物栽培品种、亲本植物品系以及突变种也通常需要保存。组织培养对于植物生长和基因型保存研究要比大田繁殖优越，节省土地、人工、能源。组织培养材料体积小，对于冷冻后解冻还能存活的细胞来说，利于在低温或超低温中长期保存。种质资源的保存和基因库的建立在育种工作中是十分重要的。
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组培快繁技术2．1组织培养组织培养就是应用无菌操作技术，培养植物的离体器官、组织或细胞。使其在人工控制的条件下进行生长和发育的技术，又叫无菌培养或离体组织培养。组培快繁技术繁殖快、用材少、遗传性状稳定；而且能解决花卉在无性繁殖过程中易产生的病毒危害，可大幅度提高种苗质量和商品率。通过分离茎尖、芽尖、根尖、胚芽、叶片、鳞片、花粉等，接种在三角瓶等人工配置的培养基上进行培养，利用植物细胞的再生能力，在适宜无菌的条件下，长出不定芽或不定根，使之形成一株新的完整植株。组织培养是进行植物快繁和保存种质材料遗传性状以及对花卉种苗进行脱毒的一项现代繁殖技术；也是研究植物细胞、组织的生长、分化和植物体器官形成规律的重要科学手段。我区组培快繁研究起步较晚，但近年来发展较快·，已用组培快繁技术先后培育出兰花、菊花、香石竹、君子兰、大花萱草、非洲紫罗兰、百合、月季、一品红、唐菖蒲、草红花、风信子、水仙、仙客来、非洲菊、卓玛花等优良花卉。2004—2005年，西藏自治区农牧科学院园区办与自治区生物研究所组培室合作，组培一品红、香石竹、非洲菊、蝴蝶兰、满天星、长寿菊、八仙花、洋桔梗、草红花等1O多种花卉试管苗成功，为西藏花卉商品化生产基地建设奠定了良好的基础。其常用花卉诱导分化培养基选用详见表1。表l 几中花卉诱导分化培养基参考表2．2 组培快繁的优点2．2．1 能保持原有品种同有的遗传性状和特性。2．2．2 节约繁殖材料。采集一小部分分离组织就能繁殖出大量花苗。2．2．3 繁殖速度快。用“一品红、蝴蝶兰”等分离组织作培养材料，在适宜条件下经过离体培养，接种后15— 3O天开始组织分化，一年内可繁殖大量的优质种苗。2．2．4 节省土地。组培快繁技术是在室内将分离组织置三角瓶或试管内进行培养的，可以充分利用空间。一般30m2的培养室就能摆放上万三角瓶，可繁殖大量优质花卉种苗。2．2．5 去病毒。目前许多花卉病毒较为严重，直接影响观赏价值；组培可进行苗木脱毒，使之成为无毒苗。2．2．6 复壮品种。对于长期使用无性繁殖，并开始退化的花卉品种，采用组培快繁，可使个体遗传性状得以恢复。3 花卉生长激素应用花卉生长调节剂，是指能调控花卉生长，开花、休眠、萌芽等过程中人工合成植物激素的总称。这类人工合成激素在植物体内对植物生理功能和形态变化起着重要作用。3．1 常用花卉生长调节剂3．1．1 植物生长素，主要有吲哚乙酸(姒)，吲哚丁酸(IBA)，萘乙酸(NAA)等。植物生长素主要具有促进细胞分裂，促进生根等作用。萘乙酸是一种具有多种用途的生长调节剂，能促进苗术生长和开花，促进插条发根，并可防治落花落果。西藏现代农业示范园区2004年试验示范，温室扦插“一品红”用500t,e,／g浓度萘乙酸(NAA)快速浸蘸，对促进生根、提高扦插成活率起到了明显的作用。3．1．2 生长延缓剂和抑制剂，主要有比久(B9)、多效唑(PP333)和矮壮素(ccc)等，具有延缓或抑制植株或枝条生长等作用。比久是一种具有多种用途的生长延缓剂，可作矮化剂、座果剂、生根剂和保鲜剂使用。应用在花卉上，可使花卉矮化粗壮；同时具有防止落花，促进座果，诱发不定根形成，提高抗寒力等作用。西藏现代农业示范园区花卉生产应用5％多效唑(PP333)可湿性粉剂喷施，对防止茶用花卉，特别是“金桔”落花、促进座果，诱发不定根形成，提高冬季抗寒力起到了显著效果。矮壮素具有抑制植物营养生长，促进生殖生长的作用。喷施矮壮素，可使花节间缩短，植株矮化，茎秆变粗，叶片增厚，叶色亮丽。并有增强植物抗旱、抗寒等作用，因此常用于菊花、大丽花、杜鹃、牡丹以及盆栽葡萄等花卉的矮化处理。3．1．3 生根粉(ABT)。ABT是一种高效、广谱性的生根促进剂，西藏6～7月份园林绿化应用较广。一般海棠砧木嫁接扦插育苗成活率可达80～90％。“1号生根粉”主要用于玖瑰、米兰、海棠、佛手、罗汉松、雪松、银杏等；“2号生根粉”主要用于月季、茶花、桅子、杜鹃、菊花、蔷薇、倒挂金钟、石榴、小叶黄杨等；“3号生根粉”用于苗木移栽时根系恢复，提高成活率。3．1．4 三十烷醇。三十烷醇是一种具有多种用途的生长调节剂，不仅具有提高种子发芽率和促进插条生根以及促进花芽分化，多开花，多结果的作用，而且还可以增加叶绿素含量，使叶色加深并能使叶片增大。西藏现代农业示范园区引进名贵花卉后，应用0．5／_tg／g浓度三十烷醇喷施，不仅能促进花卉花芽分化、多开花、多结果，而且明显增加了叶绿素含量，使叶色加深和叶片增大。3．2 植物生长调节剂在花卉上应用的效果3．2．1 促进插条生根，有利快速繁殖。萘乙酸、吲哚丁酸等生长素，配成适当的浓度，应用在一些不易发根的花木上，有较明显的促进根系生长的作用。春季温室扦插葡萄条，将插条基部放入1000btg／g萘乙酸溶液中浸泡3～5小时，取出立即扦插。扦插后50天调查，发根率比对照高出约l倍。又如将桂花嫩枝的插条浸入浓度为500／_tg／g的吲哚丁酸溶液中，5分钟取出，凉干后扦插，可提前发根。再如玉兰，再生能力差，扦插生根困难，剪取嫩枝放入2oot,e,／g萘乙酸溶液中浸泡24小时再扦插，可促进生根成活。实践证明，茉莉、米兰、含笑、橡皮树、五色梅、罗汉松、天竺葵、四季秋海棠、香石竹等多种花木，应用生长素调节后，对促进生根均有良好效果。3．2．2 促进植株矮壮，提高观赏价值。应用矮壮素12“比久”处理花卉，能有效地使植株矮化，促进分枝及花芽分化。例如天竺葵定植时土壤中拌入500t-tg／g的矮壮素，植株高度可降低10cm左右，并能提前1～2周开花。大丽花、菊花等用“比久”处理，矮化作用十分明显。据西藏现代农业示范园区试验示范，矮壮素“比久”对一品红、山茶、八仙花、杜鹃、火棘、五色梅、百合、仙来客、香石竹、翠菊、彩叶草、鸡冠花、紫罗兰、矮牵牛、万寿菊、百日草等花木均有明显矮化作用。“多效唑”对一些花卉植株的矮化作用也十分显著，如盆栽秋菊，在其生长中期(约于8月中下旬)，用浓度20ug／g的“多效唑”溶液喷洒，每隔l0～l5天喷1次，共喷两次，可使植株变矮，节间缩短，叶色变绿，茎秆变硬，此时辅之以摘心和适当施肥，即可使花型增大，花期延长，花朵艳丽。3．2．3 延长切花寿命。西藏海拔高，空气干燥，使鲜切花花期受到一定影响。插花时高原人民都希望让鲜花能多开几天，应用一些生长延缓剂，即可抑制花卉的呼吸作用，从而达到延长花期的目的。例如将香石竹花枝基部用矮化素浸泡一夜，即可延长花期2～3天。矮化素的使用浓度，夏季为50／_tg／g，冬季为l0～ 25t-tg／g。3．2．4 防止落花落果。喷洒“比久”、“萘乙酸”具有防止落花落果作用。如观叶花卉用50／J．g／g“萘乙酸”溶液喷洒，即可防止落花。又如盆栽金桔，在座果前用500／_tg／g浓度的“萘乙酸”(N从)溶液喷洒，即可抑制花芽分化，防止落果。4 BGA土壤激活剂的应用BGA土壤激活剂不同于现有化学肥料、微生物肥料、有机肥料、复合肥料、保水剂、生根粉等产品。它集保水、放水、催芽、改良士壤、供给利激活营养等多种功能于一身，除可用于正常条件下花卉种养获得养分外，最突出特点在于花卉在难以种养的恶劣条件下(如高寒、干旱、风沙、瘠薄等)，能使花卉正常生长。2OO4年，西藏现代农业示范园区应用1：20 BGA激活剂与河砂混合基质盆栽小本花卉，效果十分良好，拉萨家庭盆栽君子兰应用BGA激活剂培养土后，春季间隔30～40天浇水，亦可正常开花，而且表现花朵大、花期长等特点。应用1：15 BGA激活剂与河砂混合基质营养液喷灌技术，进行无土草坪示范，在水泥地平面，铺5crn厚度的基质，草坪从播种到形成商品仅6o天。5 介质应用5．1 栽培介质近年来，花卉栽培所用的介质，逐渐移向使用全部无土或少土的介质。这是因为无土介质大都属于园艺无毒类型，不需消毒程序，重量轻，质量均衡，价格便宜，易于操作及标准化，但介质多数不含或少含养分，栽培上应及时施用营养液。5．1．1 树皮。西藏藏东南地区松树皮和硬木树皮，具有良好的物理性质，能够部分代替泥炭作为盆栽介质。新鲜树皮的主要问题是碳氮比较高，有些树皮如察隅油桐树皮等含有对植物有害的成分，应该通过高温堆腐或淋洗降解毒性。树皮首先要粉碎，粒子直径可以大到10mm，一般的直径为1．5～6mm。对粒子的大小进行筛选，细小的粒子可作为田问土壤改良剂，粗的粒子可作为盆栽介质。木树皮作为盆栽介质，能抑制植物寄生线虫和土壤病原菌的发生。5．1．2 锯末。西藏藏东南林区木材加上后生产的锯末和树皮有类似的性质，但较易分解沉积，而过于致密则不易干燥，影响透水透气。5．1．3 草炭。又称泥炭，泥炭是古代湖沼地带的植物被埋藏地下，在渍水和缺氧的条件下不能完全分解的特殊有机物。西藏羊八井地带天然草炭资源十分丰富，为花卉产业发展提供充足的介质资源。5．1．4 珍珠岩。珍珠岩是天然的铝硅化合物，即粉碎的岩浆岩加热剑1000℃以上而形成的膨胀材料，具封闭的多孔性结构。珍珠岩较轻，通气良好，无营养成分，质地均一，不分解，阳离子代换量较低，PH7．0～7．5。珍珠岩含有钠、铝和少量的可溶性氟，氟能伤害某些植物，特别是在较低PH时用珍珠岩作繁殖介质表现明显。在使用前经过2～3次淋洗，能使可溶性氟淋火。珍珠岩较轻，容易浮在混合介质的表面。5．1．5 蛭石。蛭石是硅酸盐材料在800～l100℃下加热形成的云母状物质。在加热中，水分迅速失去。矿物膨胀后相当于原来体积的20倍，其结果是增加了通气孔隙和持水能力。蛭石呈中性至微碱性，每立方米蛭石能吸收500～650升的水，蒸汽消毒后能释放出适量的钾、钙、镁。蛭石长期栽培植物后，容易致密，使通气和排水性能变筹，因此最好不做长期盆栽植物的介质。5．1．6 河砂。河砂通常作为盆栽混合介质的组成部分。砂粒以0．2～0．5mm之间为好。河砂的容重较大，河砂的持水量和阳离子代换量较小。近几年，西藏现代农业示范园区用l：20的BGA激活剂与河沙混合基质盆载葡萄等观果花卉、花苗生长健壮，取得了良好的结果。5．2 栽培介质的配制通常盆栽介质是由两种以上的介质按一定比例配合而成的。配合起米的介质在理化性状上比单一介质要好。花卉因种类、介质材料和栽培管理不同，使用介质配方亦不同，但其总的趋向是要降低介质的容重。增加总孔隙度和增加空气和水分的含量。介质配制比例见表2。表2 介质配方比侧参考表5．3 培养土和栽培介质消毒为保证花卉茁壮生长，对培养土和栽培介质消毒是极重要的措施之一。除了已经消毒的袋装介质之外，即使是一般属于同艺无毒的介质，也应在配制后进进消毒，存储使用。多数病原微生物在60℃时经30分钟蒸汽加热后即可死亡。锰、铅、锌等重金属经高温处理后可溶性增加，过多的锰会造成植物毒害，使植物生育迟缓，叶色变褐以至枯死。用氯化苦药消毒，将培养土一层一层地倒人箱中，每10cm厚为l层，每层均匀撒布氯化苦25rnl。然后盖好密闭，待氯化苦全部散发后，即可使用。西藏种养花卉多为温室栽培，定植前，将温室中午密闭3～4小时闷棚，亦可达到营养土消毒效果。
不同基质对几种花卉组培苗移栽影响的试验研究摘要：本试验通过对卡特兰、大花蕙兰、紫罗兰、新几内亚凤仙、捕蝇草、长寿花的组培苗移栽到不同的基质中，比较其成活率和长势，以期筛选出适宜各种花卉组培苗移栽的基质配方。结果表明：卡特兰组培苗最适宜移栽的基质为1／2苔藓+1／2砂子，移栽成活率高达100％；大花蕙兰组培苗最适宜移栽的基质为苔藓，移栽成活率达100％；非洲紫罗兰组培苗最适宜移栽的基质为蛭石，其成活率达到98％；新几内亚凤仙组培苗最适宜移栽的基质为1／2蛭石+1／2草炭，其移栽成活率为96．7％；捕蝇草组培苗最适宜移栽的基质为1／2椰绒+1／2珍珠岩，其移栽成活率达到100％；长寿花组培苗最适宜移栽的基质为1／3珍珠岩+2／3蛭石，其移栽成活率达到96．7％。关键词：卡特兰；大花蕙兰；非洲紫罗兰；新几内亚凤仙；捕蝇草；长寿花；基质：移栽当今植物生物技术已发展成为新技术革命的重要组成部分，在各个生产领域运用生物技术已收到了巨大的经济效益。其中利用组织培养进行种苗的快速繁殖是运用最广、效果最好的一项生物技术。组织培养繁殖种苗，具有能保持本品种特征特性，繁殖系数高，繁殖迅速，便于工厂化和集约化生产等特性，是人们广泛应用的一项技术。利用组织培养进行快繁具有常规方法无可比拟的优越性，所以组织培养是快速繁殖和无土栽培技术中较为热门的植物繁育方法。但在繁殖过程中，移栽是最为关键的一步，只有移栽成功，组培苗才能实现它的价值。为此，我们对卡特兰、大花蕙兰、非洲紫罗兰、新几内亚凤仙、捕蝇草、长寿花的组培苗进行了移栽试验，以期筛选出适宜移栽的基质配方。l 材料与方法1．1 试验材料选用天津农学院组培实验室培养的卡特兰、大花蕙兰、非洲紫罗兰、新几内亚凤仙、捕蝇草、长寿花为移栽材料。移栽植株的大小为，卡特兰的叶展开度在2 cm～2．5 cm(厘米)之间，大花蕙兰的株高在7 cm(厘米)左右，新几内亚凤仙和长寿花的株高为3 cm(厘米)左右，非洲紫罗兰的叶展开度在3 cm(厘米)左右，捕蝇草的株高在3 Cm(厘米)左右。1．2 方法1．2、1 组培苗的锻炼将几种花卉的组培苗从培养室取出，放置于炼苗室中，室内温度保持在25℃左右，相对湿度保持在75％左右，避免阳光直射。放置2 d～3 d(天)后，打开瓶盖，让幼苗适应外界环境，早晚用喷雾器对幼苗和室内进行喷雾，以维持室内较高的湿度环境。经一个星期的炼苗过程，即可进行移栽。而捕蝇草在炼苗时，不打开瓶盖，放置3 d～4 d(天)后立即移栽。1．2．2 移栽基质的准备将苔藓、树皮、椰绒等有机基质用1％KMnO4溶液浸泡3 h(小时)，之后用清水反复冲洗干净，做到不残留KMnO4溶液；把砂子、蛭石、珍珠岩等无机基质收稿日期：2004—03—1366用常规灭菌法灭菌，后配成移栽各种花卉组培苗的基质配方。卡特兰的移栽基质配方为：①蛭石；②1／2苔藓+1／2砂子；③1／2苔藓+1／2蛭石；④苔藓；⑤1／2苔藓+1／2树皮。其具体做法就是在盆底分别放置树皮、砂子、蛭石，然后再在上面放上苔藓。移栽时要将卡特兰的根均匀分放于苔藓之中，要栽紧，栽实，使根系紧密接触苔藓，以吸收养份和水份。大花蕙兰的移栽基质配方为：① 苔藓；②1／2树皮+1／2碎石；③1／2苔藓+1／2砂子；④1／3树皮+1／3椰绒+1／3砂子；⑤蛭石。移栽时在盆底放上砂子，然后在砂子上面分别放上苔藓、椰绒+树皮、蛭石。把苗栽直、栽实，不能伤到根。非洲紫罗兰的移栽基质配方：① 蛭石；② 椰绒；③1／2蛭石+1／2草炭；④1／3蛭石+1／3砂子+1／3草炭；⑤7／15蛭石+7／15草炭+1／15鸡粪。将各基质按配方搅和均匀，将非洲紫罗兰栽紧，以防影响根系的生长。新几内亚凤仙的移栽基质配方：① 蛭石；②椰绒；③1／2蛭石+1／2草炭；④1／2蛭石+1／2砂子。将基质混合均匀后就可栽植新几内亚凤仙了。捕蝇草的移栽基质配方为：①蛭石；②苔藓；③1／2蛭石+1／2珍珠岩；④1／2椰绒+1／2珍珠岩。选植株较大的栽植到各基质中。移栽长寿花时选用的基质配方为：①蛭石；②1／2草炭+1／2蛭石；③1／5珍珠岩+2／5草炭+2／5蛭石；④1／2砂子+1／2土壤；⑤1／3珍珠岩+2／3蛭石。直接把长寿花栽植到各基质中。1、2．3 移栽把基质放到经过消毒的塑料花盆中，组培苗经炼苗后就可移栽了。移栽是用镊子把各组培苗从培养瓶中取出，分成单株，用清水冲洗干净根上残留的培养基，要做到不伤根，然后分别用800倍的多菌灵溶液浸泡植株的根部20 rain(分钟)。选择生长势良好，植株健壮的组培苗，进行移栽。移栽后要用遮阳网遮荫，并用塑料薄膜覆盖，要常浇水和喷雾，保持湿度在80％左右；温度在22℃左右。捕蝇草的移栽苗要放置在装有水的水槽中，上方加盖遮阳棚和塑料薄膜，每天进行喷雾和浇水，避免苗子萎蔫。2 结果与分析2．1 不同基质配比对卡特兰组培苗移栽成活的影响为了选出适合卡特兰组培苗生长的基质，我们选用了4种基质配比，对卡特兰组培苗进行移栽试验，并以蛭石做基质作为对照。不同基质移栽卡特兰组培苗成活率的比较从表1可以看出，卡特兰组培苗的移栽以1／2苔藓+1／2砂子的复合基质最为适宜，其幼苗移栽成活率可达100％，而且植株长势最强；其次的移栽基质是以1／2苔藓+1／2树皮和1／2苔藓+1／2蛭石的复合基质，幼苗的成活率在7O％以上；以单独苔藓为基质的更差一些；而用蛭石作为移栽的植株成活率最低，并且植株长势最弱。说明移栽卡特兰最好以苔藓加通透性强的基质为好。2．2 不同基质配比对大花葸兰组培苗移栽成活的影响在移栽大花蕙兰的试验中，我们选用了4种基质配方对大花葸兰的组培苗进行移栽，并以蛭石做基质作为对照，以比较哪种基质更适合大花葸兰苗的移栽和生长。不同基质移栽大花蕙兰成活率的比较从表2结果可以得出结论，以单独苔藓为基质的大花葸兰组培苗的移栽成活率最高，达到100％，而且植株长势最强，植株高度达到10．8 cm(厘米)；而以1／2苔藓+1／2砂子和1／2树皮+1／2碎石为基质的次之，以1／3树皮+1／3椰壳纤维+1／3砂子为基质时的成活率更低一些；以蛭石为基质的成活率最差，植株长势最弱。说明大花葸兰组培苗的生长需要较好的通透性，以苔藓和苔藓加大颗粒的基质为好。2．3 不同基质配比对非洲紫罗兰组培苗移栽成活的影响选用4种基质和蛭石为对照对非洲紫罗兰的组培苗进行移栽试验，比较各种基质中组培苗的成活率和长势。观察一个月后，调查成活率和植株开展度，结果如表3所示。从表3可以看出，不同基质移栽非洲紫罗兰组培苗，其成活率和长势有很大的差异，其中以移栽到蛭石中的其成活率和植株开展度明显高于其它几种基质配比的，成活率达到98％，开展度达11．0 cm(厘米)；而以1／2蛭石+1／2草炭、1／3蛭石+1／3砂子+1／3草炭和椰绒为基质的植株成活率和长势逐渐下降；但以7／15蛭石+7／15草炭+1／15鸡粪为基质移栽非洲紫罗兰时，其成活率明显低于其它几种基质，说明在移栽非洲紫罗兰组培苗时，不宜在基质中添加有机肥料。最适合非洲紫罗兰组培苗移栽的基质为蛭石。2．4 不同基质配比对新几内亚凤仙组培苗移栽成活的影响选用4种基质配方和以蛭石为对照对新几内亚凤仙组培苗进行移栽试验，将移栽后的凤仙组培苗放入保温、保湿的塑料棚中，移栽一个月后进行调查。新几内亚凤仙组培苗的移栽适应多种基质，以1／2蛭石+1／2草炭的基质移栽凤仙组培苗为最好，成活率达到87．1％，植株高度达12．5 cm(厘米)；在蛭石、椰绒和1／2蛭石+1／2砂子中组培苗的成活率也较高，生长情况也较好；但在1／2树皮+1／2碎石中，组培苗的成活率最低，只有33．3％，生长最差，只达5．3 cm(厘米)。说明凤仙组培苗的生长要求保水性较好的基质，而通透性强的基质不适合凤仙的移栽。2．5 不同基质配比对捕蝇草组培苗移栽成活的影响捕蝇草是起源于美洲沼泽地带的一种植物，其具有捕虫的功能，是一种有一定经济价值的植物。为了研究其组培苗移栽成活的情况，我们选用了3种基质和蛭石作为对照进行捕蝇草的移栽试验，以期筛选出适宜的捕蝇草移栽配方。移栽一个月后调查其植株成活率和植株长势用1／2椰绒+1／2珍珠岩移栽捕蝇草时，其组培苗成活率最高，达到100％，而且植株长的最大，达到5．0 cm(厘米)；其次是以苔藓为基质的，成活率为9O％，植株开展度为4．1 cm(厘米)；再次为以1／2蛭石+1／2珍珠岩为基质的，成活率为78．6％ ；而以蛭石为基质的成活率最低，只有46．7％。这说明以1／2椰绒+1／2珍珠岩配制成的基质更适合于捕蝇草组培苗的生长。2．6 不同基质配比对长寿花组培苗移栽成活的影响为了选出适合长寿花组培苗生长的基质，我们选用了5种基质配比，对长寿花组培苗进行了移栽试验，以比较哪种基质更适合长寿花的生长。观察一个月后，我们进行了调查，结果如表6所示。从表6可以看出，长寿花组培苗在几种基质中的成活率都比较高，而且植株的长势也比较接近，说明长寿花适合多种基质的移栽。但其中以1／3珍珠岩+2／3蛭石的基质最适合。
3 讨论3．1 组培苗的移栽是组织培养中的关键一环在移栽时一定要为组培苗创造一个适宜的环境条件，在移栽之前，要进行一星期左右的炼苗，出瓶时应用清水洗净根上残留的培养基，用镊子分割出单株苗，消除坏死部分。移栽时用800倍多菌灵溶液浸泡其根部2O min(分钟)进行消毒，后用清水冲净，否则残留的培养基会造成各种菌类滋生，影响植株的生长。而由于捕蝇草的特殊性，在炼苗时最好不要打开瓶盖，放置3 d-4 d(天)后立即移栽。组培苗移栽后要保温保湿，以利生长。3．2 由于植株种类的不同，其对移栽基质的要求是不同的像卡特兰和大花蒽兰等兰科植物由于其根系较粗，呼吸强度较大，所以在移栽基质的选择上就要求通透性较强的基质，如苔藓、树皮和碎石等基质比较适合。而新几内亚凤仙、非洲紫罗兰和长寿花根系的再生能力比较强，所以移栽时要求基质既保水又有一定的通气能力，故以混合基质较好。捕蝇草由于起源于沼泽地区，故移栽时要求吸水较强的基质，且要把基质浸泡在水中。3．3 几种花卉的适宜移栽基质通过试验我们得出对卡特兰、大花蒽兰、紫罗兰、新几内亚凤仙、捕蝇草、长寿花这几种花卉的组培苗进行移栽时，其适宜的移栽基质分别为：卡特兰组培苗最适宜移栽的基质为1／2苔藓+1／2砂子，移栽一个月后成活率高达100％，植株长势最强；大花蕙兰组培苗最适宜移栽的基质为苔藓，移栽一个月后成活率达100％，植株高度为1O．8 cm(厘米)；非洲紫罗兰组培苗最适宜移栽的基质为蛭石，一个月后其成活率达到98％，植株开展度为11．0 cm(厘米)；新几内亚凤仙组培苗最适宜移栽的基质为1／2蛭石+1／2草炭，其移栽一个月后成活率为96．7％，植株高度为l1．8 cm(厘米)；捕蝇草组培苗最适宜移栽的基质为1／2椰绒+1／2珍珠岩，其移栽一个月后成活率达到100％，植株开展度为5．0 cm(厘米)；长寿花组培苗最适宜移栽的基质为1／3珍珠岩+2／3蛭石，其移栽一个月后成活率达到96．7％，植株高度为5．5 cm(厘米)。综上所述，通过本试验最后我们筛选出，适合卡特兰组培苗移栽的基质是1／2苔藓+1／2砂子；适合大花蕙兰组培苗移栽的基质是苔藓；适合非洲紫罗兰组培苗移栽的基质是蛭石；适合凤仙组培苗移栽的基质是1／2蛭石+1／2草炭；适合捕蝇草组培苗移栽的基质是1／2椰绒+1／2珍珠岩；适合长寿花组培苗移栽的基质是1／3珍珠岩+2／3蛭石。参考文献：[1] 杨小玲，刘书亭．花卉组培快繁与产业化发展现状及前景[J]．天津农业科学，2OOl，7(1)：l～3．[2] 秦松，孙锐锋等．花卉栽培基质配方筛选研究[J]．贵州农业科学，2001，29(4)：38～39．[3] 李泉森，张明．石斛无土栽培基质的初步研究[J]．中国中药杂志，2000，25(1)：23～24．[4] 徐宏英，王芳等．大花蕙兰的组织培养和快速繁殖[J]．植物生理学通讯．2001，037(006)：534．[5] 郑秀芳，高丽．非洲菊试管苗移栽管理技术[J]．北方园艺，2000，(4)：6O．
菊花组织培养论文开题报告
注意植物组织培养的必要条件:细胞离体，有一定的营养物质、激素、和其他外界条件 他的原理:植物细胞的全能性 还有他的过程:制备MS固体培养基→外植体消毒→接种→培养→移栽→栽 。 理解MS培养基各成分的作用。大量元素（N、P、K、Ca、Mg、S等） 与微量元素（硼，锰，铜，锌铁，钼，碘，钴。）为植物细胞提供所需无机盐，有机物（小分子特殊营养物质）满足离体植物细胞因正常代谢受影响而产生的特殊的营养需要。蔗糖则是作为碳源以及能源组织，调节细胞渗透压 注意植物激素的作用 与它们因不同的使用顺序 ，用量，浓度等而造成的不同实验结果。还有记住愈伤组织的五个特点 还有对外植体消毒时既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。
论文开题报告基本要素
各部分撰写内容
论文标题应该简洁，且能让读者对论文所研究的主题一目了然。
摘要是对论文提纲的总结，通常不超过1或2页，摘要包含以下内容：
目录应该列出所有带有页码的标题和副标题， 副标题应缩进。
这部分应该从宏观的角度来解释研究背景，缩小研究问题的范围，适当列出相关的参考文献。
这一部分不只是你已经阅读过的相关文献的总结摘要，而是必须对其进行批判性评论，并能够将这些文献与你提出的研究联系起来。
这部分应该告诉读者你想在研究中发现什么。在这部分明确地陈述你的研究问题和假设。在大多数情况下，主要研究问题应该足够广泛，而次要研究问题和假设则更具体，每个问题都应该侧重于研究的某个方面。
这个不难啊，一般都是用的大众化的开题报告 开题报告是用文字体现的论文总构想，因而篇幅不必过大，但要把计划研究的课题、如何研究、理论适用等主要问题说清楚，应包含两个部分：总述、提纲。 1 总述 开题报告的总述部分应首先提出选题，并简明扼要地说明该选题的目的、目前相关课题研究情况、理论适用、研究方法、必要的数据等等。 2 提纲 开题报告包含的论文提纲可以是粗线条的，是一个研究构想的基本框架。可采用整句式或整段式提纲形式。在开题阶段，提纲的目的是让人清楚论文的基本框架，没有必要像论文目录那样详细。 3 参考文献 开题报告中应包括相关参考文献的目录 4 要求 开题报告应有封面页，总页数应不少于4页。版面格式应符合以下规定。 开题报告 学生： 一、 选题意义 1、 理论意义 2、 现实意义 二、 论文综述 1、 理论的渊源及演进过程 2、 国外有关研究的综述 3、 国内研究的综述 4、 本人对以上综述的评价 三、 论文提纲 前言、 一、 1、 2、 3、 ······ 二、 1、 2、 3、 ······ 三、 1、 2、 3、 结论 四、论文写作进度安排 毕业论文开题报告提纲 一、开题报告封面：论文题目、系别、专业、年级、姓名、导师 二、目的意义和国内外研究概况 三、论文的理论依据、研究方法、研究内容 四、研究条件和可能存在的问题 五、预期的结果 六、进度安排
首先要把在准备工作当中搜集的资料整理出来，包括课题名称、课题内容、课题的理论依据、参加人员、组织安排和分工、大概需要的时间、经费的估算等等。第一是标题的拟定。课题在准备工作中已经确立了，所以开题报告的标题是不成问题的，把你研究的课题直接写上就行了。比如我曾指导过一组同学对伦教的文化诸如“伦教糕”、伦教木工机械、伦教文物等进行研究，拟定的标题就是“伦教文化研究”。第二就是内容的撰写。开题报告的主要内容包括以下几个部分：一、课题研究的背景。 所谓课题背景，主要指的是为什么要对这个课题进行研究，所以有的课题干脆把这一部分称为“问题的提出”，意思就是说为什么要提出这个问题，或者说提出这个课题。比如我曾指导的一个课题“伦教文化研究”，背景说明部分里就是说在改革开放的浪潮中，伦教作为珠江三角洲一角，在经济迅速发展的同时，她的文化发展怎么样，有哪些成就，对居民有什么影响，有哪些还要改进的。当然背景所叙述的内容还有很多，既可以是社会背景，也可以是自然背景。关键在于我们所确定的课题是什么。二、课题研究的内容。课题研究的内容，顾名思义，就是我们的课题要研究的是什么。比如我校黄姝老师的指导的课题“佛山新八景”，课题研究的内容就是：“以佛山新八景为重点，考察佛山历史文化沉淀的昨天、今天、明天，结合佛山经济发展的趋势，拟定开发具有新佛山、新八景、新气象的文化旅游的可行性报告及开发方案。”三、课题研究的目的和意义。课题研究的目的，应该叙述自己在这次研究中想要达到的境地或想要得到的结果。比如我校叶少珍老师指导的“重走长征路”研究课题，在其研究目标一栏中就是这样叙述的：1、通过再现长征历程，追忆红军战士的丰功伟绩，对长征概况、长征途中遇到了哪些艰难险阻、什么是长征精神，有更深刻的了解和感悟。2、通过小组同学间的分工合作、交流、展示、解说，培养合作参与精神和自我展示能力。3、通过本次活动，使同学的信息技术得到提高，进一步提高信息素养。四、课题研究的方法。在“课题研究的方法”这一部分，应该提出本课题组关于解决本课题问题的门路或者说程序等。一般来说，研究性学习的课题研究方法有：实地调查考察法(通过组织学生到所研究的处所实地调查，从而得出结论的方法)、问卷调查法（根据本课题的情况和自己要了解的内容设置一些问题，以问卷的形式向相关人员调查的方法）、人物采访法（直接向有关人员采访，以掌握第一手材料的方法）、文献法（通过查阅各类资料、图表等,分析、比较得出结论）等等。在课题研究中，应该根据自己课题的实际情况提出相关的课题研究方法，不一定面面俱到，只要实用就行。五、课题研究的步骤。课题研究的步骤，当然就是说本课题准备通过哪几步程序来达到研究的目的。所以在这一部分里应该着重思考的问题就是自己的课题大概准备分几步来完成。一般来说课题研究的基本步骤不外乎是以下几个方面：准备阶段、查阅资料阶段、实地考察阶段、问卷调查阶段、采访阶段、资料的分析整理阶段、对本课题的总结与反思阶段等。六、课题参与人员及组织分工。这属于对本课题研究的管理范畴，但也不可忽视。因为管理不到位，学生不能明确自己的职责，有时就会偷懒或者互相推诿，有时就会做重复劳动。因此课题参与人员的组织分工是不可少的。最好是把所有的参与研究的学生分成几个小组，每个小组通过民主选举的方式推选出小组长，由小组长负责本小组的任务分派和落实。然后根据本课题的情况，把相关的研究任务分割成几大部分，一个小组负责一个部分。最后由小组长组织人员汇总和整理。七、课题的经费估算。一个课题要开展，必然需要一些经费来启动，所以最后还应该大概地估算一下本课题所需要 的资金是多少，比如搜集资料需要多少钱，实地调查的外出经费，问卷调查的印刷和分发的费用，课题组所要占用的场地费，有些课题还需要购买一些相关的材料，结题报告等资料的印刷费等等。所谓“大军未动，粮草先行”，没有足够的资金作后盾，课题研究势必举步维艰，捉襟见肘，甚至于半途而废。因此，课题的经费也必须在开题之初就估算好，未雨绸缪，才能真正把本课题的研究做到最好。
山茶花栽培技术毕业论文
茶花喜欢偏酸性的土壤，适宜的温度是18到25度，茶花是半阴性花卉，对于光热的要求不是很高，但是在花芽分化前我们还是要给它充足的光照以促进花苞的形成。
茶花喜欢温暖、湿润的气候，酷热、严寒对它均不适宜。它要求生活在半阴环境的酸性土壤中，怕干旱，忌积水。为此，在盆栽茶花中应注意，从春到秋每天向叶面喷水（不是浇水）1-2次，每隔15-20天浇一次矾肥水或硫酸亚铁液。平时浇水注意不要使盆土积水。冬季要控制浇水，每隔3-5天浇一次就够了。茶花喜阴，但不喜欢顶部遮阳，以侧方遮阳为宜。它喜暖怕冷，所以在寒露前应将盆移入室内，放置在向阳处。同时要注意防治红蜘蛛、蚧壳虫、炭疽病、煤烟病等的危害，一旦发现要及时防治。
我晕，我百度空间不是有的么？ 茶花生长适温在15~32℃之间，要求有一定温差，环境湿度60%以上，大部分品种可耐-8℃低温（自然越冬，云茶稍不耐寒），在淮河以南地区一般可自然越冬。茶花培植土要偏酸性，并要求较好的透气性。以利根毛发育，通常可用泥炭、腐锯木、红土、腐植土，或以上的混合基质栽培。茶花要求光照比杜鹃强，春秋冬三季可不遮阴，夏天可用50%遮光处理。 茶花平常要用中性或偏酸性的地表水浇灌，浇水要掌握见干见湿，干了再浇，浇要浇透，但要注意不能过干。一般在春梢末期着蕾前要适当扣水，以利向生殖生长转化，花前不能断水。 平常施肥可用熟饼（直径25-30cm盆）10克/盆；复合肥2克/盆；也可用尿素加磷酸二氢钾,每10-20天一次，以上肥料要轮换使用。如发生新梢缺铁黄化可用硫酸亚铁每周浇施一次，直到恢复为止。北方预防黄化病、根腐病，要每15-30天施硫酸亚铁一次。 茶花虫害以红蜘蛛、蚜虫、蚧壳虫、卷叶蛾、造桥虫为主，主要防治药剂用氯腈菊酯15毫升+水胺硫磷20毫升或久效磷25毫升兑30斤水喷雾。 茶花主要病害有轮纹病、炭疽病、枯梢病、叶斑病、烟煤病等，主要防治药剂有：退菌特800倍；多菌灵500倍；百菌清800倍；克霉灵800倍定期防治，花前要注意灰霉病、花枯病防治。 下面着重介绍一下北方地区如何防治茶花、茶梅落叶落花落蕾： 北方产生落叶主要有三方面原因：1、在从南方地区调运装卸时造成叶片挤压破损，在温室中容易感染炭疽病等造成病理性落叶；2、温室内温度湿度太高，特别是傍晚浇水易诱发病害造成落叶；以上两种情况可定期用上述杀菌剂进行防治；3、由于温度变化过大和水质不适应（水质过硬）以及起苗时根系受损严重，造成根系吸收组织根毛坏死，营养短缺，造成植株早衰落叶。防治对策有避免环境温度大起大落，不要用地下水直接浇灌（如用地下水要经过降盐或酸化处理），起苗时要注意根基土球不能太干，应尽量多带根球，最主要的措施：每15天左右用一次叶面肥，配方是尿素+磷酸二氢钾和腐植酸微肥（施用见说明）。轮换使用，防治早衰效果很好。 下面再谈谈落花落蕾问题。 北方种茶花落花蕾问题非常突出，咎其原因有三：1、如前所述造成落叶的几个因素都可产生落花落蕾；2、春化过渡期不足造成花蕾膨大后脱落。绝大部分茶花品种开花前要（乐山金粟苗圃销售茶花）经过一段春化期（花牡丹和部分茶梅除外）。所谓春化，就是花芽要经过一段时间的低温或短日照才能开花，不然花芽不能充分发育成熟。茶花的春化温度和时间因品种不同而异。一般要求-3℃~5℃低温，10-20天以上即可，早花品种春化时间可短些，温度可高些；迟花品种要求春化时间长些，温度要低些，如果你的茶花是在9-11月间调回，就马上进入高温温室，就会阻止春化过程，造成花芽发育停止或不全产生落蕾。所以当你调入茶花时不要急着增温，一定要使茶花在本地产生完全春化过程，让茶花经过一段时间的低温（要逐步降温）保持0~2℃最低温和5~7℃最高温,持续20天以上，在进行逐步升温到最低温度8~10℃，最高温度15~25℃就能顺利开花；3、光照不足造成落花落蕾，北方冬季室外因寒冷，很多家庭直（乐山金粟苗圃销售茶花）接放在室内过冬，一方面由于室内温度高造成春化不足，另一方面光照又严重不足，造成营养虚耗，室内湿度又太低，极易产生落花落蕾。防治措施有先要通过低温春化过程（如2所述），在室内要摆放在有光线直射的地方，并连盆罩以塑料薄膜增湿，直至开花。 总而言之，要防止茶花落叶落蕾落花一定要采用综合措施，创造适宜环境，细心管理，环环相扣，才能取得良好效果。
问题一：茶花的种植方法及怎么养护 光照温度 长江以北春植为好，长江以南秋植为好。地栽 应选排水良好、保水性能强。富含 腐殖质的沙壤土。 山茶为半阴性花卉，夏季需搭棚遮阴。立秋后气温下降，山茶进入花芽分化期，应逐渐使全株受到充足的光照。冬季应置于室内阳光充足处，若室内光线太弱，山茶则生长不良，并易得病虫害。山茶为长日照植物。在日长12小时的环境中才能形成 花芽。最适生长温度18-25℃，最适开花温度10-20℃，高于35℃会灼伤叶片。不耐寒，冬季应入室，温度保持3-5℃，也能忍耐短时间-10℃的低温，但不能长时间超过16℃，否则会促使发芽，引起落叶。生长期要置于半阴环境中，不宜接受过强的直射阳光。特别是夏、秋季要进行遮荫，或放树下疏荫处。山茶喜温暖，怕寒冷。室内温度不能低于5℃。温度在10℃至15℃的房间内，其他措施得当，春节即可开花，花期可至3月份。 浇水施肥 山茶对肥水要求较高，中性和 碱性壤土均不利其生长。北方尤其要注意将碱性水经过酸化处理后才，可浇花，具体办法是将自来水贮放2天，使水中的氯气挥发掉，再加入适量硫酸亚铁(占水左右)。浇水量不可过大，否则易烂根。盆土也不能干，否则易使根因失水而萎缩，以保持盆土和周围环境湿润为宜。花期勿喷水。一般冬季室内较干燥，应经常向山茶叶面喷水，以形成一个湿润的小气候。但阴雨天忌喷水。浇水时不要把水喷在花朵上，否则会引起花朵霉烂，缩短花期。花谢后及时摘去残花。冬季浇水要视室内温度而定，一般3天左右一次，保持盆土湿润，忌积水或浇半截水。用自来水应先在水桶中存放一两天，让氯气挥发掉。水中最好放百分之一的硫酸亚铁，以利于改善水质。 山茶喜肥。一般在上盆或换盆时在盆底施足基肥，秋冬季因花芽发育快，应每周浇一次腐熟的淡液肥，并追施1次至2次磷钾肥，氮肥过多易使花蕾焦枯，开花后可少施或不施肥。施肥以稀薄 矾肥水为好，忌施浓肥。一般春季萌芽后，每17天施1次薄肥水，夏季施磷、 钾肥，初秋可停肥1个月左右，花前再施矾肥水，开花时再施速效磷、钾肥，使花大色艳，花期长。 问题二：茶花怎么样种植？ 茶花怎样浇水? 茶花栽种区域广，条件千差万别：有潮湿的西南，有干燥的西北；要根据具体地点和实际情况而定。 (1)茶花浇水的基本原则 ①茶花的浇水原则 茶花浇水的实践表明， “干透浇透”是浇水的原则。 “干”就是盆土中水分少； “透”就是盆土不仅表面干,而且盆土内部也干。当然“干”因茶花是肉质根系，容易腐 烂，严重时造成枯死。即使盆土疏松、流水畅通，浇透水的茶花根系舒畅，生长良好。 ②茶花浇水的时间 茶花浇水，有的载文说，夏季天热“一天一次。听、捻的实践活动来确定是否需要浇水，是最科学的。 (2)茶花浇水的特殊阶段 ①茶花的育蕾阶段 5～6月间是茶花花芽的分化阶段，再恢复正常浇水。 ②茶花的开花阶段 茶花在开花过程中，消耗水分较多，需水量增加，如不及时浇足水，以防积水烂根。 ③茶花的幼苗阶段 正在培育的茶花小苗，要适当多浇水，保持土壤潮湿，再采用茶花浇水的一般原则”干透浇透“. ④茶花的冬季阶段 从10月下旬起，随着气温的下降，茶花枝叶的蒸发量减少，保证它开好花。 (3)茶花冬、夏季的浇水时间 ①冬季 冬季气温低，特别是早晚很冷，有时处于冰冻状态。避免了晚上直接冰冻的危害。 ②夏季 夏季天气炎热，茶花浇水以早上为最佳，晚上次之．浇洒之水要与盆土温度相近，以减轻对茶花的危害。 (4)茶花各种浇用水 ①天然水 茶花用天然水浇灌为最佳，因为天然水有下面三个特征，最适合茶花浇用。这是天然水特征之一。 空气中有一种氮化物，常凝结在雨点中，如遇上雷电可使氮气氧化，这是天然水特征之二。 雨水中轻水多，重水少。由于重水有放射性，对茶花有抑制作用。这是天然水特征之三。 ②淘米水 这种水最适合茶花浇用，一举两得。施用方法：冲淡后才可使用。 ③自来水 由于自来水中含有上百种矿物质和漂白粉，就可用它来浇灌山茶花。有利于茶花生长。 (5)浇用水的温度。 一般来说，浇用水的水温应与当时的气温一致为宜，导致落叶夭折。 另一个是浇用水的温度高于盆土的温度。一般而言，而且有利茶花的吸收利用. (6)茶花缺水性萎蔫的分析及其挽救方法 当茶花枝叶的细胞因缺水过多而干缩萎蔫时，如果立即浇水，待它恢复生机之后，再逐步浇透水。 （7）茶花盆土龟裂时的浇水方法 夏季气温很高，水分蒸发快，盆土干燥龟裂，效果良好。 冬季养好茶花应注意以下几点： 光照:山茶为半阴性花卉，夏季需搭棚遮阴。立秋后气温下降，并易得病虫害。 温度:山茶喜温暖，怕寒冷。室内温度不能低于5℃。温度在10℃以形成一个湿润的小气候。但阴雨天忌喷水。 浇水:冬季浇水要视室内温度而定，一般3天左右一次，水中最好放百分之一的硫酸亚铁，以利于改善水......>> 问题三：茶花的栽培方法 茶花的栽培与管理技术 一、土壤：喜排水良好具保水、透气性佳的富有机质砂质壤土为宜。可以砂质壤土60%＋腐叶土40%调配使用最为理想。 三、灌溉给水：喜湿润、排水良好。故应适时给水，尤其应防夏季缺水的西晒乾燥现象或建物辐射热伤害，以免妨害其生长。当花芽分花时，更不可断水、缺水，以免著花不易或引起落花。 四、施肥：可以有机质肥为主供应：骨粉、草木灰、油粕。或过磷酸石灰、氯化钾。其N-P-K比为：5-3-2，开花后可施重肥，5～7月花芽分化期间忌施肥，尤其是氮肥，以免仅萌发叶芽。 五、摘蕾：茶花的花芽分化多为六月间，但摘蕾时须视花蕾如黄豆一般大小时约在9～11月间才可进行。摘蕾的原则为：每节花芽仅留一个花蕾为原则，且其花蕾须朝上，并不可伤及新芽。 六、花后处理：12～1月间：花后应尽早除去残花，并立即追肥，在支干基部起仅保留2～3节新芽，其馀顶端可去除。4～5月间：须减少供水，使新芽所生长之枝条不会过分伸长，以免后续之花芽分化的萌花蕾数减少。培育场所宜于半日照、通风良好之凉爽环境培育。忌炎热、密闭、阴湿或乾燥区域栽培。 盆栽的种植与管理 1・定植 在每年2―3月树液将要流动或开始流动时，将山茶花苗木移入排水保水性能良好的肥沃疏松的微酸性土壤。属盆栽的，盆土按腐叶土、菌根土、细沙以4：3：2的比例配合，再添加少量的磷、钾肥或复合肥混合而成。混合后的土壤最好用2％甲醛或其它药物进行灭菌处理。栽植地点宜选在半阴地，切勿种在整天被阳光直射的地方，以免光照太强灼伤树叶和花朵。移栽时，尽量使其根系舒展，压实土、浇透水。 2・遮光 山茶花为半阳性植物，喜半阴地环境，适宜生长在气候温暖、空气湿润的地方。为防止灼伤，可采用架设遮荫棚或遮阳网的办法解决。如果是盆栽花，最好将其放置在荫棚的东边，使其上午能得到足够的光照，中午和下午又不会被烈日，照射到。 3・浇水 山茶花对水分要求较严，要尽量使土壤湿度保持在半墒状态。土壤过乾会导致生长不良、落叶，甚至死亡；太湿易引起根系腐烂。浇水量和浇水次数要根据季节不同而有差异。春季和秋季浇水量较多，每次浇水以土壤在浇完后捏能成团、放可松散为宜。冬季少浇，属盆景的只浇至盆土湿润100px深左右。夏季浇水量最大、浇水次数最多，每次浇水要将土壤全部浇湿浇透，但不能积水。对盆景浇水时，不可对准根部，以免冲击根部使根外露。 4・施肥 山茶花不可多施肥，特别是不要施人粪、麻饼等肥性太“燥”(即肥力强)的肥料，一般施用肥性较柔和的肥料为宜，如经浸泡腐熟的猪粪水、豆饼水等。施肥量囚季节的更替而变化：春季，树体生长势复苏，在开花后开始浇肥水，随著生长加快，逐渐增加浇肥次数；5-6月，每月浇肥水4～5次；7月是生长最盛的季节，浇6～8次；8月以后逐渐减少，秋分(9月)以后，停止施肥，直到第2年春天。施肥水与浇水要轮流进行。 5・防冻 山茶花怕严寒，易冻伤，因此在冬初要做好越冬准备，可采用树干刷白或捆稻草的办法进行。遇下雪天气，可用扫除树上的雪、在园子四周烧火土灰(可提高园内温度)的办法解决。是盆景的，则将其移人温室内；遇上冬天的晴天，在中午将其搬出室外，受短时阳光照射和换气通风，以弥补光照不足、通气不良的缺点。 6・换盆 盆栽每年都要将盆土更换。每换一次盆，花盆须递大一号。换盆时，把山茶花植株连同盆土全部弄出来，用小木棒将近盆边的土挑松，使其根系舒展，须根太长的，可适当剪短。换盆前，在新植入的花钵底部小孔处放一瓦片(既可渗水又可防止盆......>> 问题四：四季茶花的种植方法 1、栽植：地栽应选优良品种、排水性能强，肥沃的沙土壤。用新高脂膜喷雾土壤表面，可保墒防水分蒸发、防晒抗旱、保温防冻、防土层板结，窒息和隔离病虫源，保护幼苗茁壮成长。 2、光照、除草、浇水、施肥：山茶也喜阳光，但也不宜直接接受过强的光线，夏、秋季要进行遮荫，山茶对肥水要求较高，随时保持湿润，按需求合理施肥，喷洒新高脂膜保肥保墒。 3、整形修剪：山茶主要剪去干枯枝、病弱枝、交叉枝、过密枝，明显影响树形的枝条，以及疏去多余的花蕾。在剪枝伤口涂抹愈伤防腐膜，保护伤口愈合组织生长，防腐烂病菌侵染。 4、花期控制：山茶不耐寒，怎样能延缓花期，还能使山茶“十一”开花，温度控制、肥水正常、在花蕾喷洒花朵壮蒂灵，可促使花蕾强壮、花瓣肥大、花色艳丽、花香浓郁、花期延长。 问题五：茶花种子怎么种 (1)种子采收与贮藏：秋季待果实稍有开裂时立即采收，置于室内阴凉通风处晾干，待果实自然开裂后取出种子。采种后需立即播种，也可层积砂藏处理。将细砂用清水洗净消毒后，将种子与细砂分层铺放到适当的容器中，上层盖厚5cm的细砂，然后将容器埋人土中，经常检查防止霉烂和鼠害。 (2)种子处理：茶花种皮坚硬，需经处理后，才能使种子萌发迅速整齐。可采用以下方法处理：一是用利刀将种皮刻伤；二是用40－50℃的温水浸种半小时，再用清水于20～25℃下浸泡5～6天，取底层种子作为播种用种；三是用100μg／g的赤霉素溶液浸泡一昼夜。 (3)播种：种子量大时，可用苗床条播，做宽1m、长自定的苗床，条播行距1 5～20cm，将种子芽眼向下，放入深5cm的沟内，株距1－2cm,播后灌透水一次。种子量少时可用盆播，将种子播于盆中，覆土厚度－1cm，用喷壶轻轻喷透水。 (4)播后管理：播后，可用塑料薄膜或玻璃，盖住苗床、花盆，以保持湿度，保持温度18－25℃，并给予充足的光照(避免强光直射)，每天适当通风换气，及时清除杂草，防治地下害虫，发生霉菌时，可用％的高锰酸钾喷雾消毒。1个月左右开始发芽，幼苗长至3－4片叶时移栽上盆，选7－10cm口径的盆，一盆一株，置阴凉通风处，用喷壶喷透水，一周左右定根后，逐渐增强光照，并施一次稀薄液肥。 问题六：山茶花应该如何种植 茶花正名山茶，别名茶花。古称海榴，为山茶科山茶属常绿赏花乔木，有时长成灌木样。株高米至5米，高矮不等。叶互生厚革质、表面光亮，卵圆至椭圆形。花单生或并生于叶腋及枝顶。观赏品种多为重瓣，有白、粉红、玫红及嵌合斑等不同花色，花期10月或翌春3月，一般不结实。盆景茶花，有的开花多，有的则开花稀少。要让其多开花，需采取一些措施。 1．促生长健壮，多发新枝由于茶树花芽的形成是在当年新生枝条上，所以3月～4月，当茶树叶芽萌发时，应及时把植株上的残花全部摘除。同时追施以氮肥为主的腐熟稀薄液肥三四次，每隔7天左右施1次。 2．促使多形成花蕾5月以后，新枝开始进行花芽分化，并逐渐形成花蕾。此时应结合扦插繁殖进行修剪。修剪后立即施1次磷钾肥，以后每隔10天左右施1次，连续施三四次。 3．防止花蕾脱落为防止花蕾脱落，盆土要保持湿润，不能过湿或过干。切忌施未腐熟的肥料和浓度较高的肥料。一般9月～10月各施1次稀薄磷肥，11月停止施肥。当花蕾长到如黄豆大小时要进行疏蕾，一般一个枝端只留1个花蕾。发现病虫害及时喷药防治。 4．防阳光直射和低温冻害夏季、秋季应将盆景茶花置于室外荫棚下，忌太阳光线直射。冬季气温在0℃以下时，应将其搬进室内置于向阳处，室内温度保持3℃～5℃为好，并注意适当通风。山茶是我国原产的传统名花，现今遍布世界各地，品种上万。我国优良品种约有300个。常见栽培的有 白洋花：又名千叶（页）白，花白色，平展无皱。什样锦：花型同白洋茶，花色桃红并嵌合白色条斑或在白花瓣上嵌合红色条瓣。鱼血红：花形同白洋茶，花色殷红，在外轮的一二枚花瓣上带有白斑。红茶花：又名杨贵妃，外轮花瓣宽平，内轮花瓣细碎，粉红色。小五星：花形与红红茶相似，桃红色，有的间杂白斑，雄蕊杂生在内轮细碎的花瓣中。 朱顶红：花形与红茶花相似，朱红色。木兰茶花：花瓣较窄，呈半直立状，重瓣，玫瑰红色。金星：花单瓣、深红色，花萼铁黑色，上有茸毛，花期长达4个月之久，较耐寒。小桃红：叶形窄狭色淡，花桃红色，花期早而长，可自11月一直开到翌年4月，较耐寒。四面锦：花红色，花瓣呈卷心状，共四组，故名四面锦。 山茶在江南各地露地栽植，播种、扦插、嫁接都能繁殖，多用来美化山坡及丘陵地段的风景区栽在其他常绿乔木的北侧或林缘下。花期多在1-3月间，北方各地均作盆栽。 北方家庭莳养的茶花，大都为来自江、浙、闽、粤地扦插、嫁接培育的盆栽苗。南花北养，须顺其天性，创造与之相适应的环境条件。 山茶属暖温带树种。性喜气候温和湿润清爽的半阴环境，最怕北方的狂风烈日。晚秋虽耐寒，但也抗不住风急天干。10月即应注意躲避风霜，夜间气温将至5℃时入室。放明亮处，但遇气温突又回升，仍需大开门窗通风降温。否则室温持续25℃以上，又闷热不通风，2天至 3天内即会出现叶片枯黄，甚至叶和花蕾俱落的现象。处界气温下降，室内升温到15℃左右早春即可开花。 北方冬季漫长干寒，山茶有半年多需放室内。一般住室空气干燥，常有烟尘污染，对花生长不利。有时寒气自门窗缝隙暗袭，加上居室门窗不时关闭，冷风直吹，忽冷忽热，较易造成枝叶焦枯，落叶落蕾。可因地制宜用铅丝作框架制成薄膜幕罩，保温、保湿并防烟尘污染。 山茶属肉质深根性花木，每2年至3年应于春季出室前换喷更新土壤。花盆宜深，盆土要求富含腐殖质、疏松、肥沃、通透性强的酸性培养土（），水质微酸性。初从闽、粤地区引进的用当地塘泥盆栽的山茶，在北方莳养最多一年须换盆土。4月清明后，视天气情况择半阴无风日出室。放庭院疏荫下或阳台内漫射光处，使其逐渐适应室外环境。山茶喜润怕涝。应适量浇水，经常保持盆土湿......>> 问题七：茶花如何培养 茶花培植土要偏酸性，并要求较好的透气性。浇水要掌握见干见湿，干了再浇，浇要浇透。平常施肥可用熟饼、复合肥、也可用尿素加磷酸二氢钾，每10-20天一次。茶花生长适温在15~32℃之间，光照比杜鹃强，春秋冬三季可不遮阴，夏天可用50%遮光处理。 问题八：山茶花的栽种都是用什么栽培方法？ 山茶花的栽培技术（一）概说 茶花为山茶科山茶属的常绿小乔木或灌木，俗名又称山茶花。原产于中国大陆、台湾、日本、韩国；其品种全世界原有九十馀种，但近年来欧美国家陆续进行品种的交配与改良后，其品种持续大量增加之中。 茶花的叶片多为革质互生，边缘有锯齿。其叶的形态可分为：椭圆形、长椭圆形、广椭圆形、卵形、倒卵形及披针形六种。 叶的形状，依叶部的弯曲形状可分为：平坦、外曲、波曲、反曲、中折等五种。 茶花的叶色及斑纹亦具有极大的变化，主要为「遗传性枝叶变种」与「滤过性病毒引起的黄斑」所产生。其斑纹多由白色或黄色构成：中斑、散斑、重斑、扫斑、覆轮、镶边等七种斑纹形式。 茶花，多为离瓣花；花期于十一月至翌年二、三月间。 花型，依「花瓣」构成形态可分为：一重瓣、八重瓣及千重瓣三大类，若依「花药」、「雄蕊」构成形态则可区分：唐子型、二段型、牡丹型及狮子型四大类。 花色，茶花的花色极多，主要的花色有：红色、深红色、黑红色、紫红色、朱红色、桃红色、桃色、浓桃色、浅桃色、淡桃色、白色、粉色、粉红色、黄色、淡黄色…等。 花纹，茶花的纹样表现主要由“遗传性变异”与“滤过性病原体”所引起的，因此若属于“滤过性病原体”所导致的红底白斑，其白斑将时会出现或消失。纹样可分为：竖直斑、小条纹、喷点斑、筋入纹、红覆轮、白覆轮、白星斑、白云斑、横云斑、全色…等九大类。 （二）种类 一般所谓的茶花，亦称之「山茶花」或「茶花」或「椿」…等皆可。但其品种品系亦主要分为下列三大系类： 一、山茶花系（.）：日名“椿”。 知名品种如：五宝、白六角、红六角、七巧、九曲、十八学士、白宝塔、广东粉、鲤鱼珠、佛顶茶…等。 二、南山茶系（.）：又名“云南茶”“大理茶”。 知名品种如：胭脂红、大银红、红碗茶、迎春红、赛牡丹、紫袍、连蕊、鹤顶红、一品红、锦袍红、靖安茶、宝珠茶…等。 三、茶梅系（.）：日名“山茶花”。 知名品种如：白雪、八重梅、淡紫、富士之峰、狮子头、朝仓、七福神、御美衣、大锦、夕阳、大朱杯、金世界、丽玉…等。 （三）繁殖技术 一、扦插繁殖法： 繁殖适期：于梅雨季节后的4～5月间进行，土壤温度约20～25oC。 “茶花”的插穗可取长度约10～15公分，保留2～3片叶子；“茶梅”的插穗可取长度约6～10公分，保留3～4片叶子。剪取后可直接扦插，若留置超过一小时以上时，须先行浸水保鲜于40小时内扦插完成。扦插入土约1/3～1/2深度即可。 二、嫁接繁殖法 繁殖适期：可于2～3月或6～7月间进行。 茶花的“接穗”可取去年生（即二年生）的充实枝条，每节留一芽一叶切取，叶部切除仅留1/3即可。“台木”必须培养其树势、且生长强健壮者，在台湾地区多以油茶作为台木。 嫁接方式常用“切接”、“割接”、“接”及“靠接”行之。 三、高压繁殖法 繁殖适期：须于梅雨季节后的4～6月间进行。 茶花的“高压”可采“环状剥皮”方式进行，于表皮与形成层间割剥长约1～公分的环状剥皮后，再以含水量约85％的水苔包裹，经30～45天后始发根，再经约20～30天待发根完全后，即可剪下上盆培育。 四、播种繁殖法 繁殖适期：“采收即播法”于9～11月间。“春播法”的最佳时期于3～4月间，最晚亦可于5......>> 问题九：茶花冬天如何种植 茶花冬季管理的重点是防冻，保花蕾。如果管理不当，会影响开花质量。为了使花朵开得大，色彩鲜，花期延长，应主要做好两方面的工作。 （1）防冻保暖 茶花比较耐寒。笔者的大盆茶花，已在自然条件下经历了5个寒冬腊月，生长健壮，花蕾满树。但是小盆幼苗，弱苗，病株和4年以下的小树，气温低于0。C时需要防冻保暖，以免伤苗。冬季保暖的方法有： 〈1〉阳台暖室 城市养茶花，若无底层庭院，一般可在阳台上设小小暖室，让茶花避寒越冬。这种小小暖室通常以45度角的坡度，用木条做成支架，四周用塑料薄膜封闭而成。在严寒天气的夜间用草苫覆盖其上，以防温室内冰冻伤苗。 〈2〉庭院暖室 长江以南各省，市的茶花爱好者，有条件的可以在自己院落里搭建暖棚，用以避寒。这种暖棚通常用毛竹片弯曲成弓形插入土中，组成枝架，是盖塑料薄膜即成。在暖棚内没有暖气，利用白天太阳的光热给棚内增温。对于冰冻的天气，晚上在暖棚上边加盖草苫，以作保温。 〈3〉居室内越冬 栽培少量茶花的业余爱好者，如果房屋条件允许，气温降到0。C以下时，应将茶花搬进屋内越冬。但盆花应放向阳处，并经常向叶面喷雾水，以增加光照量和空气湿度。 （2）保护花蕾 〈1〉水分 茶花在冬季处于休眠期或半休眠状态，由于气温低，叶面水分蒸发量少，根系吸水量下降，所以浇水不宜多，盆土适当偏干。但对正在开花的茶花，由于生理上的需要盆土偏湿，但要防止盆中积水烂根，造成落花，落蕾。 〈2〉肥料 冬季茶花处于微弱的生理活动状态，表现为叶芽，花蕾等的缓慢生长，所以需要养料不多，一般由株体内储存部分供应，少量从土壤中吸取，所以在入冬前施肥不当，肥量过多，肥液过浓，施入生肥等，将会导致落蕾的发生，严重时连株枯死。 〈3〉花蕾 盆栽的茶花，一般每一健壮枝上保留1个壮蕾为佳。过多常因养分供应为足而造成落蕾，落花，并影响翌年的开质量。地栽茶花养分来源丰富，植株粗大，根系分布深广，花蕾可以适当多留，以每枝条1~~~2个花蕾为好。过多不但花朵小，花期短，而且花后植株衰退，影响新花蕾的形成和发育。 〈4〉室内越冬的茶花，要保护花蕾健壮而不落，应做到四防：一防光照不足，室内的盆栽茶花应放在向阳处，保证一定的光照量；二防空气不流通，应经常打开门窗，有利通风换气；三 防室内烟尘过多，影响茶花呼吸运动，应根据具体情况洗叶保洁；四防空气过干，要及时喷水保温。